GPR137基因沉默對人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖,克隆和周期的實驗研究.pdf

1、目的：利用RNA干擾(RNAi)技術(shù)沉默GPR137基因在多種惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的表達(dá),闡明GPR137對惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、克隆形成能力等方面的影響。
　　方法：利用免疫組化技術(shù)對29例不同級別人膠質(zhì)瘤組織中GPR137的表達(dá)及與病理分級相關(guān)性進(jìn)行分析。利用半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(semi-quantitative RT-PCR)檢測GPR137基因在五種惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U251,U-87MG,U-118MG,A172,U37

2、3)中的表達(dá)。構(gòu)建針對GPR137基因的短發(fā)卡(shRNA)慢病毒表達(dá)載體,包裝成病毒顆粒并感染人膠質(zhì)瘤U251和A172細(xì)胞,采用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)和Western印跡法驗證GPR137基因的mRNA和蛋白的表達(dá),確定其抑制效率。采用噻唑藍(lán)(MTT)比色法和克隆形成實驗檢測細(xì)胞增殖和克隆形成能力情況,應(yīng)用流式細(xì)胞分析法檢測細(xì)胞周期分布情況。觀察沉默GPR137基因?qū)251和A172細(xì)胞增殖、克隆形成和周期分布的影響。
　　結(jié)

3、果：不同級別人膠質(zhì)瘤組織中GPR137表達(dá)均異常上調(diào),且與膠質(zhì)瘤臨床病理分級呈正相關(guān)。通過半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)證實,GPR137基因在五種膠質(zhì)瘤細(xì)胞中均顯著表達(dá)。實時定量聚合酶鏈反應(yīng)和Western印跡法顯示,GPR137-shRNA能有效抑制U251和A172細(xì)胞中GPR137基因的mRNA和蛋白的表達(dá)。MTT和克隆形成實驗顯示,感染后的膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖和克隆形成能力明顯受到抑制。流式細(xì)胞分析法顯示,感染后的膠質(zhì)瘤細(xì)胞周期停滯在

4、S期。上述差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義﹙P<0.05﹚。
　　討論以往的文獻(xiàn)已經(jīng)證實信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路和相關(guān)的膜蛋白,特別是G蛋白偶聯(lián)受體(GPCRs)家族在膠質(zhì)瘤的形成中發(fā)揮著重要的作用。腫瘤細(xì)胞通過G蛋白偶聯(lián)受體得以存活、增殖、侵犯周圍組織、并躲避免疫機(jī)制。人體內(nèi)已知的800多種G蛋白偶聯(lián)受體大部分已經(jīng)明確其結(jié)構(gòu)和功能,并成為藥物作用靶標(biāo)。然而,目前仍有100多種被稱為孤兒受體的G蛋白偶聯(lián)受體,其結(jié)構(gòu)和作用仍然不清楚,GPR137正是其中一

5、種孤兒受體。GPR137位于人第11號染色體的R56區(qū),在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)廣泛表達(dá)。已經(jīng)有文獻(xiàn)報道GPR137基因參與體內(nèi)一些腫瘤的形成過程,如肝癌、乳腺癌、前列腺癌等。但在腦膠質(zhì)瘤中的作用國內(nèi)外尚未有報道。
　　結(jié)論：本研究中,GPR137在多種腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞中高表達(dá)。敲減GPR137后,U251和A172細(xì)胞增殖、克隆形成受到顯著抑制,而且細(xì)胞周期停滯在S期。說明GPR137在膠質(zhì)瘤的增殖,克隆形成等方面發(fā)揮著重要的作用。然而相關(guān)