TK基因轉(zhuǎn)染骨肉瘤U-2細(xì)胞體外的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 研究脂質(zhì)體介導(dǎo)的TK/GCV系統(tǒng)對人骨肉瘤細(xì)胞的殺傷作用及其產(chǎn)生的旁觀者效應(yīng)。
　　 方法：
　　 構(gòu)建重組質(zhì)粒pIRES-EGFP-tk，制備和轉(zhuǎn)化感受態(tài)大腸桿菌BL21以及鑒定測序，提取、純化重組質(zhì)粒DNA，培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染入骨肉瘤細(xì)胞株U-2OS，流式細(xì)胞儀分析和熒光倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長狀態(tài)，用轉(zhuǎn)染后的培養(yǎng)液的上清加入TK（-）U-2OS中觀察旁觀者效應(yīng)。
　　 結(jié)果：
　　 成

2、功地構(gòu)建出包含有tk基因cDNA片段的重組質(zhì)粒pIRES-EGFP-tk，通過PCR等方法鑒定質(zhì)粒大小和位點均符合實驗設(shè)計。熒光顯微鏡下觀察U-2OS(TK+)呈現(xiàn)綠色熒光。U-2OSTK/GCV培養(yǎng)上清液可明顯誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。但將上清液用0.2μm的濾膜濾過后，誘導(dǎo)凋亡作用消失。
　　 結(jié)論：
　　 成功構(gòu)建重組質(zhì)粒pIRES-EGFP-tk，體外實驗表明人骨肉瘤細(xì)胞系U-2OS對脂質(zhì)體介導(dǎo)的TK/GCV系統(tǒng)敏感，并且有