腺相關(guān)病毒載體介導(dǎo)的反義VEGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)骨肉瘤生長(zhǎng)作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf_第1頁(yè)
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1、第一部分含人反義VEGF基因腺相關(guān)病毒載體的包裝及滴度測(cè)定;目的:包裝高滴度的含人反義VEGF基因腺相關(guān)病毒載體.方法:將已克隆到表達(dá)質(zhì)粒pUF3-anti-hVEGF165基因,通過(guò)三種腺相關(guān)病毒前體質(zhì)粒(包裝質(zhì)粒-pXX2,腺病毒輔助質(zhì)粒—pXX6,表達(dá)質(zhì)粒pUF-anti-hVEGF165及pUF-LacZ)通過(guò)共轉(zhuǎn)染293細(xì)胞而同源重組,成功地復(fù)制了一種高滴度、無(wú)腺病毒污染的rAAV載體,并進(jìn)行斑點(diǎn)雜交.結(jié)論:構(gòu)建高滴度的腺相關(guān)

2、病毒,為下一步實(shí)驗(yàn)提供目的基因.第二部分rAAV—antiVEGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)MG-63骨肉瘤細(xì)胞VEGF表達(dá)和細(xì)胞增殖的作用;目的:觀察以腺相關(guān)病毒(rAAV)為載體的血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子(VEGF)反義基因轉(zhuǎn)染對(duì)骨肉瘤細(xì)胞中VEGF表達(dá)和細(xì)胞增殖的影響.結(jié)論:rAAV—antiVEGF可封閉VEGF mRNA,使已轉(zhuǎn)染rAAV—antiVEGF的MG-63細(xì)胞表達(dá)的VEGF蛋白減少,抑制該細(xì)胞增殖.第三部分腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的反義VEGF

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