Livin基因轉(zhuǎn)染對(duì)人骨肉瘤U-2OS細(xì)胞生長及化療敏感性的影響.pdf

1、中國醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文Livin基因轉(zhuǎn)染對(duì)人骨肉瘤U2OS細(xì)胞生長及化療敏感性的影響姓名：安貴峰申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：骨外科學(xué)指導(dǎo)教師：呂剛20080401肢療法預(yù)后差，5qz生存率不到20％。目前雖在術(shù)前術(shù)后給予化療后生存率有所提高，但對(duì)于化療耐受和轉(zhuǎn)移復(fù)發(fā)的病例，化療或手術(shù)常難以奏效。因此，應(yīng)當(dāng)在腫瘤的生物治療方面深入研究，以探索有效的輔助治療方法，提高骨肉瘤的治愈率。RNA干擾(RNAinterference，RNAi)技術(shù)是

2、近年來發(fā)展起來的新技術(shù)，它主要利用雙鏈RNA(doublestrandedRNA)在細(xì)胞內(nèi)經(jīng)Dicer酶的識(shí)別、結(jié)合、酶切產(chǎn)生有活性的長度為21～23ntd、干擾RNA(smallinterferenceRNAsiRNA)，與目的基因mRNA結(jié)合并使之降解，從而抑制目的基因的表達(dá)。RNAi的發(fā)現(xiàn)為基因治療學(xué)提供了更為有效的方法。Livin基因作為細(xì)胞凋亡抑制蛋白(inhibitorofapoptosisprotein，tAP)家族的新成

3、員，由于其具有在正常組織中不表達(dá)，而在人類腫瘤中高表達(dá)的特性，有望成為腫瘤治療的選擇性靶點(diǎn)，近年來引起學(xué)者們的廣泛關(guān)注。我們的前期研究表明，Livin在人正常組織中不表達(dá)，在骨肉瘤組織中高表達(dá)，提示其在骨肉瘤的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用。本研究通過RNAi技術(shù)靶向抑制人骨肉瘤MG63細(xì)胞Livin基因表達(dá)，探討利用體外轉(zhuǎn)錄的siRNA的方法誘導(dǎo)骨肉瘤細(xì)胞凋亡，從而為骨肉瘤的基因治療提供新策略。目的第一部分：探討Livin和Caspase一3

4、的表達(dá)在骨肉瘤發(fā)生中的可能作用及其臨床意義。第二部分：研究轉(zhuǎn)染Livin基因?qū)θ斯侨饬鯱20S細(xì)胞生長及化療敏感性的影響。第三部分：體外轉(zhuǎn)錄合成凋亡抑制蛋I芻Livin基因siRNA通過RNAi技術(shù)靶向抑制人骨肉瘤MG63細(xì)胞Livin基因表達(dá)，觀察其在骨肉瘤細(xì)胞株MG63中抑制Livin表達(dá)后細(xì)胞增殖及細(xì)胞凋亡情況，從而為骨肉瘤的基因治療提供新策略。方法第一部分：用SABC免疫組化方法檢測“vin和Caspase3在45例骨肉瘤及30