黃芪甲苷對(duì)3,4苯并芘(BaP)誘導(dǎo)內(nèi)皮祖細(xì)胞(EPCs)損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察黃芪甲苷對(duì)BaP誘導(dǎo)EPCs損傷的保護(hù)作用，并探討其保護(hù)機(jī)制。
　　 方法:（分為兩部分）
　　 （一）黃芪甲苷對(duì)BaP損傷EPCs細(xì)胞生物學(xué)功能的保護(hù)作用:利用密度梯度離心法離心收集人臍血單個(gè)核細(xì)胞(Mononuclear Cell，MNC)，采用細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)EPCs，通過(guò)Ⅷ因子相關(guān)抗原的免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)及Dil標(biāo)記的乙酰低密度脂蛋白(Dil-ac-LDL)攝取和FITC標(biāo)記的荊豆凝集素（FITC-UE

2、A-1 lectin）結(jié)合雙熒光試驗(yàn)等方法鑒定細(xì)胞。消化收集第4代細(xì)胞，隨機(jī)分為6組:①正常對(duì)照組(Control):不做任何處理;②溶劑對(duì)照組(DMSO): DMSO終濃度為:1mL·L-1）;③BaP組:BaP濃度為20μmol·L-1;④黃芪甲苷各組（黃芪甲苷①、黃芪甲苷②、黃芪甲苷③，BaP均為20μmol·L-1）:黃芪甲苷濃度分別為:2，10，50μg·mL-1，上述黃芪甲苷預(yù)先保護(hù)2小時(shí)，再用BaP處理24小時(shí)，分別采用細(xì)

3、胞計(jì)數(shù)試劑盒(Cell Counting Kit-8，CCK-8)發(fā)檢測(cè)細(xì)胞增殖能力，粘附能力測(cè)定實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞粘附能力，Transwel小室檢測(cè)細(xì)胞遷移能力。
　　 （二）機(jī)制研究:同上消化收集第4代細(xì)胞，隨機(jī)分為6組:①正常對(duì)照組(Control):不做任何處理;②溶劑對(duì)照組(DMSO): DMSO終濃度為:1mL·L-1;③BaP組:BaP濃度為20μmol·L-1;④黃芪甲苷各組（黃芪甲苷①、黃芪甲苷②、黃芪甲苷③，BaP

4、均為20μmol·L-1）:黃芪甲苷濃度分別為:2，10，50μg·mL-1，上述各組黃芪甲苷預(yù)先保護(hù)2小時(shí)，再用BaP處理24小時(shí)，采用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定(ELISA)法檢測(cè)各組EPCs培養(yǎng)上清液中IL-1β及TNF-α含量;采用免疫印跡法(WesternBlotting，WB)檢測(cè)各組EPCs總蛋白中高級(jí)糖基化終產(chǎn)物受體(RAGE)蛋白的含量。
　　 結(jié)果:
　　 （一）黃芪甲苷對(duì)BaP損傷EPCs細(xì)胞生物學(xué)功能的保護(hù)

5、作用；
　　 1.EPCs的鑒定:通過(guò)密度梯度離心法以及細(xì)胞貼壁培養(yǎng)能成功培養(yǎng)出EPCs，細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察顯示為鋪路石樣結(jié)構(gòu);EPCs特征性標(biāo)志物表達(dá)陽(yáng)性。
　　 2.與正常對(duì)照組相比，BaP組細(xì)胞的增殖能力、粘附能力以及遷移能力均明顯降低(P＜0.05);與BaP組相比，黃芪甲苷各組細(xì)胞的增殖能力、粘附能力以及遷移能力均明顯增高(P＜0.05)，黃芪甲苷濃度越大，各組細(xì)胞生物學(xué)功能越趨向于正常對(duì)照組(P＜0.05)。

6、r>　　 （二）機(jī)制研究；
　　 培養(yǎng)上清液中的IL-1β及TNF-α變化:與正常對(duì)照組相比，BaP組培養(yǎng)上清液中的IL-1β及TNF-α含量均明顯提高(P＜0.01);與BaP組相比，黃芪甲苷各組培養(yǎng)上清液中的IL-1β及TNF-α含量明顯下降(P＜0.01)，并且隨著黃芪甲苷濃度的增高呈現(xiàn)出遞減的趨勢(shì)(P＜0.05)。
　　 細(xì)胞RAGE蛋白變化:與正常對(duì)照組相比，BaP組細(xì)胞總蛋白R(shí)AGE蛋白的表達(dá)量明顯提高(P