黃芪甲苷拮抗鎘致心肌細(xì)胞損傷的作用.pdf

1、目的:探討鎘對大鼠心肌細(xì)胞存活率，閏盤超微結(jié)構(gòu)及縫隙連接蛋白43的表達(dá)分布及其轉(zhuǎn)錄水平的影響，以及黃芪甲苷的保護(hù)機(jī)制。
　　 方法:①體外模型:1-3天SD乳鼠，取心室肌組織經(jīng)剪碎、消化，再采用差速貼壁法純化心肌細(xì)胞;獲得的心肌細(xì)胞采用倒置顯微鏡、透射電鏡觀察、HE染色及免疫熒光法鑒定。原代培養(yǎng)的心肌細(xì)胞分五組:對照組、10umol·L-1鎘組、10umol·L-1鎘+10mg·L-1黃芪甲苷組、10umol·L-1鎘+20mg

2、·L-1黃芪甲苷組和10umol·L-1鎘+50mg·L-1黃芪甲苷組，共培養(yǎng)24h后用于MTT檢測心肌細(xì)胞存活率及觀察心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變。②體內(nèi)模型:21只SD大鼠隨機(jī)分為正常組、鎘處理組（腹腔內(nèi)注射鎘1 mg·d-1）、鎘加黃芪甲苷處理組（鎘的劑量為1 mg·d-1，黃芪甲苷的劑量分為5 mg·d-1和10 mg·d-1），各實驗組又分為處理后1周和2周組。大鼠麻醉開胸，取心室肌組織，分別做光鏡、透射電鏡觀察、免疫組織化學(xué)檢測、

3、生物醫(yī)學(xué)圖像分析及實時熒光定量PCR檢測。
　　 結(jié)果:①體外實驗:倒置顯微鏡下培養(yǎng)心肌細(xì)胞多呈不規(guī)則的梭形或多角形，并相互接觸呈放射狀排列的細(xì)胞簇;H-E染色后清晰可見被染成藍(lán)紫色的細(xì)胞核和被染成紅色的細(xì)胞質(zhì);透射電鏡觀察到細(xì)胞呈橢圓形，細(xì)胞核清晰，胞質(zhì)內(nèi)線粒體豐富，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基體發(fā)達(dá)，高倍鏡下部分細(xì)胞可見胞內(nèi)呈細(xì)絲狀，交錯排列的肌絲及電子密度較高的Z線樣物質(zhì)。24h的MTT細(xì)胞存活率實驗結(jié)果顯示，鎘組較對照組心肌細(xì)胞的存活

4、率明顯降低;鎘加不同濃度黃芪甲苷組與對照組比較，存活率雖有明顯的降低，但明顯高于鎘組，且鎘加黃芪甲苷(20mg·L-1)組存活率是最高的。透射電鏡觀察到鎘組心肌細(xì)胞核呈現(xiàn)不規(guī)則分葉，甚至裂解形成高電子密度碎塊，胞質(zhì)固縮，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腔明顯擴(kuò)張，線粒體腫脹并出現(xiàn)空泡化及髓鞘樣結(jié)構(gòu)，極個別細(xì)胞呈現(xiàn)典型凋亡形態(tài);而鎘加黃芪甲苷組的心肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)損傷均較鎘組輕。②體內(nèi)實驗:與正常組相比，鎘組光鏡和透射電鏡下心肌細(xì)胞和閏盤超微結(jié)構(gòu)破壞嚴(yán)重，免疫組織化