檢測TMU、IB和ND病毒多重PCR方法的建立及應(yīng)用.pdf

1、鴨坦布蘇病毒（TMUV）是一種在2010年新發(fā)現(xiàn)的病毒，引發(fā)鴨產(chǎn)蛋下降、生長阻滯、甚至死亡。近年來，也發(fā)現(xiàn)這種病毒感染雞，對養(yǎng)雞業(yè)造成一定損失，且出現(xiàn)的癥狀與其它呼吸道病原的感染有許多相似之處。引起雞呼吸道疾病的病原還有新城疫病毒（NDV）、傳染性支氣管炎病毒（IBV）、禽流感病毒（AIV）等。目前在很多地區(qū)出現(xiàn)了與TMUV的混合感染病例，依靠臨床癥狀已經(jīng)不能鑒別診斷這幾種病原的多重感染。此外，雞群中也經(jīng)常存在同一個體在同一時間受到不同

2、的病毒感染的情況。所以，如果能同時檢測同一份病料中不同的種類的病毒，將對流行病學(xué)調(diào)查以及疫病的鑒別診斷起到非常重要的作用。
　　本研究建立了NDV、IBV、TMUV3種禽類病毒的多重PCR檢測方法。通過生物信息學(xué)的分析，設(shè)計了針對這3種病毒的特異性引物，對PCR的反應(yīng)條件進(jìn)行了退火溫度與引物濃度的梯度優(yōu)化，結(jié)果顯示引物濃度在0.1~10 pmol/μL,退火溫度53℃或56℃時，能夠清晰擴(kuò)增出3個病毒基因的條帶，分別為386 bp

3、（IBV），588 bp（NDV）和821bp（TMUV）。建立的多重 PCR方法能夠準(zhǔn)確的擴(kuò)增出三種病原(NDV、IBV和TMUV)的核酸片段，且沒有擴(kuò)增出其他病原的特異性片段。表明此方法對上述三種病原的檢測有很好的特異性。同時，該多重PCR檢測方法能同時檢測到的NDV、IBV、TMUV三種病毒目的基因的最小濃度分別為1.79 ng/μL、125pg/μL、23.4 pg/μL，表明該多重PCR檢測方法具有較高的敏感性。
　　隨