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1、背景及目的:
乳腺癌是世界范圍內(nèi)女性發(fā)病率最高的惡性腫瘤,占總癌癥病例的23%和癌癥死亡病例的14%。在我國(guó),乳腺癌的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),且趨于年輕化,是對(duì)婦女健康威脅最大的疾病之一。由于缺少相應(yīng)的篩查措施或治療手段不當(dāng),我國(guó)乳腺癌的死亡率也逐漸升高。因此,深入探討乳腺癌的發(fā)病機(jī)理十分必要。隨著分子生物學(xué)機(jī)制在腫瘤學(xué)領(lǐng)域的更深入研究,分子靶向治療越來(lái)越多的展現(xiàn)出它獨(dú)有的優(yōu)勢(shì)。沉默信息調(diào)節(jié)因子家族(Sirtuins)被認(rèn)為在調(diào)
2、控衰老和壽命方面發(fā)揮重要作用。Sirtuins由7個(gè)成員組成,即SIRT1-SIRT7。SIRT3作為線粒體去乙?;福荢irtuins家族的重要成員。最近幾年的研究發(fā)現(xiàn)SIRT3不僅參與了機(jī)體壽命的調(diào)節(jié),其在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中亦具非常重要的作用。近期研究發(fā)現(xiàn):SIRT3在肝癌細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)于癌旁組織顯著降低,且SIRT3高表達(dá)可使總生存期(OS)與RFS延長(zhǎng)。此外,SIRT3的高表達(dá)可以抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞的凋亡。在肺腺癌,
3、胃癌,胰腺癌中,SIRT3表達(dá)均下調(diào),SIRT3的過(guò)表達(dá)抑制細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)細(xì)胞死亡。與此結(jié)果相反,另有一些研究表明:在口腔鱗癌、食管癌、膀胱癌中SIRT3敲低顯著抑制腫瘤發(fā)生,起促進(jìn)腫瘤進(jìn)展的作用。由此發(fā)現(xiàn),SIRT3在不同類型腫瘤中的作用機(jī)制有待進(jìn)一步研究。目前關(guān)于SIRT3在乳腺癌中作用的研究尚不完善,本實(shí)驗(yàn)以SIRT3為靶點(diǎn),通過(guò)免疫組織化學(xué)測(cè)定其在乳腺癌組織中的表達(dá)情況,Western blot測(cè)定SIRT3在乳腺癌細(xì)胞的表達(dá)水
4、平,以及RT-PCR實(shí)驗(yàn)測(cè)定SIRT3分子在RNA水平的表達(dá),從而探討SIRT3在乳腺癌疾病進(jìn)展中的作用;通過(guò)將SIRT3的表達(dá)情況與患者臨床病理特征進(jìn)行相關(guān)性分析及生存分析,探討 SIRT3與乳腺癌預(yù)后相關(guān)性;通過(guò)研究SIRT3基因的過(guò)表達(dá)與敲低條件下分別對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖能力的影響,探討SIRT3在癌細(xì)胞中的功能和性質(zhì),從而探索SIRT3是否有望成為乳腺癌治療的潛在靶點(diǎn)。
方法:
1.應(yīng)用組織芯片技術(shù),通過(guò)免疫組化
5、法檢測(cè)SITR3在乳腺癌組織及癌旁組織的表達(dá),評(píng)價(jià)SIRT3在乳腺癌組織的表達(dá)情況,并分析SIRT3的表達(dá)與患者臨床病理學(xué)特征的相關(guān)性。根據(jù)隨訪結(jié)果對(duì)所有病例進(jìn)行單因素及多因素生存分析,分析SIRT3的表達(dá)與乳腺癌患者預(yù)后的相關(guān)性。
2.應(yīng)用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù),通過(guò)Western blot檢測(cè)SIRT3在乳腺癌細(xì)胞系EMT6,乳腺成纖維細(xì)胞系MEFs的蛋白表達(dá)水平。
3.通過(guò)熒光定量PCR檢測(cè)SIRT3 mRNA在乳腺癌細(xì)
6、胞系EMT6,乳腺成纖維細(xì)胞系MEFs的表達(dá)情況。
4.通過(guò)MTT實(shí)驗(yàn)觀察上調(diào)及下調(diào)SIRT3基因?qū)θ橄侔〦MT6細(xì)胞增殖能力的影響。
結(jié)果:
1、SIRT3在乳腺癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)率84.72%(122/144)低于癌旁正常組織表達(dá)率96.63%(86/89)。兩組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.572, P<0.05)。SIRT3在乳腺癌中的表達(dá)與患者下列臨床病理學(xué)特征存在相關(guān)性:年齡、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期
7、、HER-2表達(dá)(P<0.05);然而,SIRT3的表達(dá)與病理分級(jí)、浸潤(rùn)深度、ER受體及PR受體的表達(dá)情況無(wú)關(guān)(P>0.05)。單因素分析顯示:乳腺癌中SIRT3表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期、HER-2表達(dá)情況與預(yù)后相關(guān)(P<0.05);多因素COX比例風(fēng)險(xiǎn)分析顯示SIRT3的表達(dá)情況及TNM分期均具有獨(dú)立的預(yù)后意義。
2、Western blot結(jié)果顯示:乳腺癌細(xì)胞中SIRT3的表達(dá)水平明顯降低。定量數(shù)據(jù)顯示:SIRT3在乳
8、腺癌細(xì)胞的相對(duì)表達(dá)量(0.220±0.173)明顯低于非癌性細(xì)胞(0.850±0.086),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=7.133, P=0.002,P<0.01)。
3、RT-PCR結(jié)果顯示:SIRT3在乳腺癌細(xì)胞的mRNA水平較非癌性細(xì)胞明顯降低。SIRT3在乳腺癌細(xì)胞中的表達(dá)水平(0.520±0.069)明顯低于非癌性細(xì)胞(0.886±0.034),差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=4.729, P=0.009,P<0.01)。
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