慢病毒介導(dǎo)BMPRⅡ基因沉默對(duì)人肝癌移植瘤生長(zhǎng)的影響.pdf

1、目的：
　　探討B(tài)MPR II基因RNA干擾（RNAi）的重組慢病毒載體對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞裸鼠移植瘤BMPR II基因表達(dá)和移植瘤生長(zhǎng)的影響。
　　方法：
　　1、前期研究已明確了具有下調(diào) BMPR II基因的siRNA干擾序列，設(shè)計(jì)并合成shRNA oligo,退火后構(gòu)建入干擾慢病毒載體pL/shRNA/F-BMPR II，用構(gòu)建的慢病毒載體pL/shRNA/F-BMPR II轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，包裝慢病毒，并用熒

2、光法測(cè)定滴度，用包裝的pL/shRNA/F-BMPR II干擾慢病毒侵染HepG2細(xì)胞。
　　2、通過(guò)實(shí)時(shí)定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(qRT-PCR)、蛋白印跡（Western Blot）技術(shù)檢測(cè)慢病毒轉(zhuǎn)染后各組細(xì)胞中BMPR II mRNA及蛋白水平表達(dá)的變化，明確處理后BMPR II沉默的效果。
　　3、建立人肝癌HepG2細(xì)胞裸鼠移植瘤模型，隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。隔天1次向各組動(dòng)物腫瘤內(nèi)分別注射BMPR

3、II shRNA慢病毒顆粒、攜帶無(wú)效序列的慢病毒顆粒和0.9％氯化鈉溶液0.2 ml，共5次，測(cè)量各組腫瘤體積的大小，繪制腫瘤生長(zhǎng)曲線，13天后處死裸鼠。
　　4、應(yīng)用Western blot及免疫組化技術(shù)檢測(cè)移植瘤中BMPR II蛋白水平表達(dá)。
　　結(jié)果：
　　1、qRT-PCR及Western bolt檢測(cè)結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染組與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，BMPR II mRNA及蛋白表達(dá)水平明顯下調(diào)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

4、（P<0.05）。
　　2、繪制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)曲線顯示，與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組腫瘤生長(zhǎng)速度明顯減慢（P<0.05）；空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）?？瞻讓?duì)照組和陰性對(duì)照組剝脫的瘤體體積分別為（1274.6±133.02）mm3和（1255.2±130.05） mm3，而實(shí)驗(yàn)組剝脫的瘤體體積為（328.6±87.72） mm3
　　3、Western blot及免疫組化技術(shù)檢測(cè)顯示：

5、實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，移植瘤組織 BMPR II蛋白表達(dá)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組移植瘤組織相比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、BMPR II shRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染入人肝癌HepG2細(xì)胞后，可有效抑制BMPR-ⅡmRNA及蛋白在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)。
　　2、BMPR II shRNA慢病毒載體瘤內(nèi)注射可抑制人肝癌HepG2細(xì)胞裸鼠移植瘤的生