2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
已閱讀1頁(yè),還剩67頁(yè)未讀, 繼續(xù)免費(fèi)閱讀

下載本文檔

版權(quán)說(shuō)明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)

文檔簡(jiǎn)介

1、研究背景:
  侵襲和遷移是惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的重要特征,大約90%的患者死于腫瘤的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移。在婦科惡性腫瘤中,卵巢癌死亡率位居首位。因其臨床癥狀隱匿,診斷時(shí)75%的患者已屬晚期,雖然超過(guò)80%的患者經(jīng)一線治療受益,但Ⅲ/Ⅳ期卵巢癌患者的5年生存率徘徊在25%-30%。因此,深入了解卵巢癌發(fā)生發(fā)展的分子機(jī)制,并尋求新的治療方法刻不容緩。目前基因治療為卵巢癌的治療提供了新的希望。近年來(lái)興起的RNA干擾技術(shù)因具有很強(qiáng)的轉(zhuǎn)錄后基因沉默作用,

2、由于其高效性和特異性在基礎(chǔ)研究方面展現(xiàn)出強(qiáng)大的優(yōu)勢(shì),然而如何將其優(yōu)勢(shì)發(fā)揮到臨床靶向治療卻是一個(gè)難題。
  RhoA基因是Rho家族成員之一,作為惡性腫瘤侵襲及轉(zhuǎn)移的“開(kāi)關(guān)”基因,參與多種惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展。RhoA基因激活可以導(dǎo)致細(xì)胞癌變,且RhoA信號(hào)通路在參與調(diào)控腫瘤的生長(zhǎng)和增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移、細(xì)胞凋亡及腫瘤新生血管形成等方面發(fā)揮重要作用。因此,以RhoA基因?yàn)榘悬c(diǎn)的基因治療將有望成為卵巢癌靶向治療的一個(gè)新方向。
  本研

3、究組在前期研究中,已利用RNA干擾技術(shù)成功構(gòu)建了針對(duì)RhoA基因的慢病毒干擾載體并建立了卵巢癌穩(wěn)定沉默RhoA基因細(xì)胞株,且體外實(shí)驗(yàn)證實(shí)慢病毒介導(dǎo)RNAi下調(diào)RhoA基因表達(dá)可抑制卵巢癌細(xì)胞增殖、侵襲及遷移能力。由于體外實(shí)驗(yàn)并不能完全真實(shí)的評(píng)價(jià)對(duì)于卵巢癌干預(yù)措施的可行性和有效性,而建立合適的裸鼠移植瘤模型對(duì)于模擬卵巢癌的病理狀態(tài)并評(píng)價(jià)治療措施是必須的,且有著非常重要的作用。故本研究在此基礎(chǔ)上,建立卵巢癌裸鼠移植瘤模型,首先探討RhoA基

4、因沉默對(duì)卵巢癌裸鼠腹腔侵襲轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為的影響;其次采用慢病毒介導(dǎo) RhoA shRNA對(duì)其卵巢癌裸鼠皮下移植瘤進(jìn)行抗癌治療的研究,以探討其可行性、有效性及抗腫瘤機(jī)制。
  第一部分 RhoA基因沉默抑制卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤惡性生物學(xué)行為的研究
  目的: 構(gòu)建卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤模型,研究慢病毒介導(dǎo)RhoA基因沉默對(duì)人卵巢癌裸鼠腹腔移植瘤生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移等惡性生物學(xué)行為的影響。
  方法:
  1. SP

5、F級(jí)雌性BALB/C裸鼠21只應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為三組,利用已建立的穩(wěn)定沉默RhoA的HO8910-RhoA-shRNA細(xì)胞,陰性對(duì)照組HO8910-RhoA-NC細(xì)胞,和空白對(duì)照組HO8910細(xì)胞這3組細(xì)胞分別建立裸鼠卵巢癌腹腔移植瘤模型。
  2.每2天測(cè)量腹圍,4周后解剖裸鼠。大體觀察:測(cè)定腹水量;統(tǒng)計(jì)腫瘤播散器官數(shù)及瘤結(jié)節(jié)數(shù);稱量瘤體重量,并計(jì)算抑瘤率。
  3.鏡下觀察:應(yīng)用HE染色分析移植瘤病理形態(tài)學(xué)特點(diǎn)。

6、>  4.實(shí)時(shí)熒光定量PCR和Western blot檢測(cè)移植瘤RhoA mRNA和蛋白表達(dá)情況。
  5.脫氧核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的核苷酸缺口末端標(biāo)記(TUNEL)技術(shù)檢測(cè)移植瘤凋亡指數(shù)(apoptotic index,AI)。
  結(jié)果:
  1.HO8910-RhoA-NC組和HO8910組的裸鼠成瘤率均為100%,而穩(wěn)定沉默RhoA基因的HO8910-RhoA-shRNA組裸鼠成瘤率僅為71.4%,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)

7、學(xué)意義(P=0.231)。
  2.與陰性對(duì)照HO8910-RhoA-NC組和空白對(duì)照HO8910組比較,RhoA基因穩(wěn)定沉默HO8910-RhoA-shRNA組裸鼠腹圍增長(zhǎng)明顯滯后(P<0.05);腹水量明顯減少(P=0.01),腫瘤播散器官數(shù)、瘤結(jié)節(jié)數(shù)及瘤體重量均明顯減少(P<0.001),抑瘤率達(dá)70.62%;
  3.實(shí)時(shí)熒光定量PCR及Western Blot結(jié)果顯示,與陰性對(duì)照HO8910-RhoA-NC組和空白

8、對(duì)照HO8910組比較, HO8910-RhoA-shRNA組移植瘤RhoA基因mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著下降(P<0.001);
  4. TUNEL結(jié)果提示,與陰性對(duì)照HO8910-RhoA-NC組和空白對(duì)照HO8910組比較, HO8910-RhoA-shRNA組移植瘤AI明顯升高(P<0.001)。
  結(jié)論:
  卵巢癌細(xì)胞HO8910在腹腔內(nèi)的生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移均受到RhoA的影響,慢病毒介導(dǎo)RhoA基因穩(wěn)

9、定沉默時(shí),裸鼠腹腔移植瘤的重量、數(shù)量及播散轉(zhuǎn)移均相應(yīng)減少,一定程度上延緩了卵巢癌的惡性生物學(xué)行為。
  第二部分靶向RhoA基因的shRNA對(duì)卵巢癌裸鼠皮下移植瘤治療的研究及其作用機(jī)制探討
  目的: 探討靶向RhoA基因的shRNA對(duì)卵巢癌裸鼠移植瘤的影響及可能的抗腫瘤作用機(jī)制。
  方法:
  1.采用細(xì)胞接種法將人卵巢癌細(xì)胞HO8910接種于18只雌性BALB/C裸鼠右前肢腋下建立裸鼠腋下移植瘤模型。荷瘤裸

10、鼠模型建成后,應(yīng)用隨機(jī)數(shù)字表法分為3組進(jìn)行治療實(shí)驗(yàn),即實(shí)驗(yàn)組(予攜帶靶向RhoA基因的shRNA慢病毒液治療)、陰性對(duì)照組(予攜帶針對(duì)隨機(jī)無(wú)關(guān)序列的shRNA慢病毒液治療)、空白對(duì)照組(予磷酸鹽緩沖液),分別于治療開(kāi)始第1,5,9,13天進(jìn)行注射,比較3組裸鼠的移植瘤生長(zhǎng)情況,包括移植瘤生長(zhǎng)速度、腫瘤體積,并繪制移植瘤生長(zhǎng)曲線。治療結(jié)束10d后處死裸鼠,剝離腫瘤,稱腫瘤質(zhì)量并計(jì)算抑瘤率,同時(shí)留取各組裸鼠腹腔主要臟器。
  2.應(yīng)用

11、HE染色,鏡下觀察3組移植瘤組織病理形態(tài)學(xué)特征,并判斷裸鼠腹腔臟器有無(wú)轉(zhuǎn)移及慢病毒液的毒性反應(yīng)。
  3.采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)、免疫組化SP法和蛋白印跡法檢測(cè)移植瘤組織中RhoA mRNA和蛋白的表達(dá);
  4. TUNEL法檢測(cè)3組裸鼠移植瘤細(xì)胞的凋亡情況[以凋亡指數(shù)(AI)表示]。
  結(jié)果:
  1.自治療開(kāi)始的第9天起,實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)速度滯后于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=

12、0.000)。治療結(jié)束后10 d,實(shí)驗(yàn)組裸鼠的移植瘤體積為(338±114) mm3,小于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組[分別為(1190±332)和(1101±396)mm3],差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P分別為0.000、0.001);實(shí)驗(yàn)組裸鼠平均腫瘤質(zhì)量為(0.23±0.11)g,低于陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組[分別為(0.79±0.19)、(0.74±0.17)g],差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。而陰性對(duì)照組裸鼠移植瘤的生長(zhǎng)速度、移植瘤

13、體積、平均腫瘤質(zhì)量分別與空白對(duì)照組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  2.HE染色光學(xué)顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn),實(shí)驗(yàn)組腫瘤細(xì)胞呈大片壞死區(qū)域且核固縮多見(jiàn),而陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組腫瘤細(xì)胞無(wú)明顯變化。此外,觀察發(fā)現(xiàn)三組裸鼠腹腔肝、脾、肺及腎組織HE染色結(jié)果顯示形態(tài)正常,且均未見(jiàn)腫瘤細(xì)胞浸潤(rùn)。
  3.實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤組織中,RhoA mRNA的表達(dá)水平為(0.30±0.05),低于陰性對(duì)照組的(0.95±0.06)和空白對(duì)

14、照組的(1.00±0.11),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);RhoA蛋白的表達(dá)水平為(0.14±0.06),低于陰性對(duì)照組的(0.78±0.14)和空白對(duì)照組的(0.75±0.13),差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000);而陰性對(duì)照組裸鼠移植瘤組織中RhoA mRNA和蛋白的表達(dá)水平分別與空白對(duì)照組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  4.實(shí)驗(yàn)組裸鼠移植瘤組織AI為(20.9±3.4)%,高于陰性對(duì)照組的(5.2

15、±2.0)%和空白對(duì)照組的(6.0±2.1)%,差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000)。而陰性對(duì)照組裸鼠移植瘤組織中AI與空白對(duì)照組比較,差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
  結(jié)論:
  1.通過(guò)慢病毒介導(dǎo)靶向沉默RhoA的基因治療有效下調(diào)卵巢癌裸鼠皮下移植瘤組織中RhoA基因的表達(dá),抑制了卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的生長(zhǎng),裸鼠動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明RhoA基因沉默治療有效。
  2.慢病毒介導(dǎo)靶向沉默RhoA基因抑制卵巢癌生長(zhǎng)

溫馨提示

  • 1. 本站所有資源如無(wú)特殊說(shuō)明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
  • 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
  • 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁(yè)內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒(méi)有圖紙預(yù)覽就沒(méi)有圖紙。
  • 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
  • 5. 眾賞文庫(kù)僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
  • 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
  • 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。

最新文檔

評(píng)論

0/150

提交評(píng)論