慢病毒介導(dǎo)的RNAi沉默TLR4基因?qū)θ烁伟┞闶笠浦擦錾L(zhǎng)的影響.pdf

1、目的:
　　探討TLR4基因RNA干擾(RNAi)的重組慢病毒載體對(duì)人肝癌裸鼠移植瘤TLR4基因表達(dá)和移植瘤生長(zhǎng)的影響。
　　方法:
　　1、構(gòu)建1個(gè)陰性對(duì)照質(zhì)粒和2個(gè)miR-TLR4質(zhì)粒,選擇干擾效果最明顯的質(zhì)粒進(jìn)行慢病毒包裝用于裸鼠移植瘤實(shí)驗(yàn)。
　　2、建立人肝癌裸鼠移植瘤模型,隨機(jī)分成實(shí)驗(yàn)組、陰性對(duì)照組和空白對(duì)照組。隔天1次向各組動(dòng)物移植瘤內(nèi)分別注射TLR4 miRNA慢病毒顆粒、攜帶無關(guān)序列的慢病毒顆?；?/p>

2、0.9％氯化鈉溶液0.2ml,共5次,且注射前測(cè)量各組移植瘤體積的大小,并繪制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)曲線;11天后處死裸鼠,將瘤體稱重并計(jì)算抑瘤率,并應(yīng)用半定量反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和Western bolt技術(shù)檢測(cè)移植瘤中TLR4基因的表達(dá)。
　　結(jié)果:
　　Western bolt檢測(cè)干擾效率顯示,轉(zhuǎn)染干擾片段1、2及陰性對(duì)照片段與對(duì)照組相比,轉(zhuǎn)染干擾片段1后,TLR4蛋白表達(dá)量顯著減少,即干擾片段1干擾效果最明顯

3、(P<0.05)。故將干擾片段1和陰性對(duì)照片段進(jìn)行慢病毒包裝。繪制裸鼠移植瘤生長(zhǎng)曲線顯示,與空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)組移植瘤生長(zhǎng)速度明顯減慢(P<0.05);空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組相比,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組剝脫的瘤體瘤重分別為(2.32±0.03)g和(2.26±0.02)g,而實(shí)驗(yàn)組剝脫的瘤體瘤重為(0.95±0.02)g,實(shí)驗(yàn)組瘤體瘤重顯著低于空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<