慢病毒介導(dǎo)的ATF5基因沉默及其對(duì)荷人卵巢癌裸鼠移植瘤增殖的影響.pdf

1、目的:
　　將慢病毒介導(dǎo)的ATF5-siRNA注射入人卵巢癌裸鼠移植瘤內(nèi)，觀察慢病毒介導(dǎo)的人轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)基因沉默效果，及其對(duì)荷人卵巢癌裸鼠移植瘤增殖及凋亡的影響。
　　方法:
　　1.取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的SKOV-3細(xì)胞，并且皮下注射于裸鼠右側(cè)腋窩，建立荷人卵巢癌裸鼠移植瘤模型。接種人卵巢癌細(xì)胞7天后，將30只裸鼠隨機(jī)分為3組，分別為:(1)空白對(duì)照組:瘤內(nèi)注射PBS100μl/（只·次）;(2)陰性對(duì)照組:瘤

2、內(nèi)注射空載慢病毒100μ l/（只·次）;(3)實(shí)驗(yàn)組:瘤內(nèi)注射ATF5-siRNA慢病毒100μ l/（只·次）。觀察裸鼠的一般情況，包括飲食、睡眠、活動(dòng)、精神狀態(tài)等，定期測(cè)量移植瘤的長(zhǎng)徑及短徑，計(jì)算移植瘤的體積，并繪制移植瘤生長(zhǎng)曲線，4周后處死裸鼠，取出腫瘤組織并稱重移植瘤的重量，計(jì)算抑瘤率。
　　2.采用RT-PCR及Western-blot的方法檢測(cè)各組腫瘤組織中ATF5mRNA及蛋白的表達(dá)情況，采用TUNEL法檢測(cè)移植瘤

3、組織的凋亡情況。
　　結(jié)果:
　　1.實(shí)驗(yàn)組中移植瘤的生長(zhǎng)速度明顯落后于陰性對(duì)照組及空白對(duì)照組，實(shí)驗(yàn)組中移植瘤的重量及體積均明顯低于空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組(P＜0.01)。實(shí)驗(yàn)組抑瘤率49.60％。
　　2.實(shí)驗(yàn)組與空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組相比，ATF5mRNA及蛋白的表達(dá)水平均明顯下降(P＜0.01)，提示慢病毒介導(dǎo)的ATF5基因沉默可以顯著干擾ATF5基因的表達(dá)。
　　3.TUNEL結(jié)果顯示，ATF5基因沉默后

4、能顯著引起移植瘤組織的凋亡:ATF5-siRNA慢病毒實(shí)驗(yàn)組凋亡指數(shù)為(34.63±1.91)％，空白對(duì)照組為(5.07±0.20)％，陰性載體組為(6.04±0.19)％，實(shí)驗(yàn)組的凋亡率明顯增高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　結(jié)論:
　　將攜帶ATF5-RNAi的慢病毒注射入SKOV3裸鼠移植瘤內(nèi)，可使移植瘤組織內(nèi)ATF5的表達(dá)明顯沉默，并能夠有效地抑制裸鼠移植瘤的增殖，促進(jìn)移植瘤組織的凋亡。RNA干擾抑制A