糖尿病性骨質(zhì)疏松發(fā)病規(guī)律及Runx2、Osterix在骨形成中的作用.pdf

1、目的：
　　 觀察1型糖尿病大鼠骨代謝指標(biāo)的變化特點(diǎn)，探討糖尿病性骨質(zhì)疏松癥的發(fā)病規(guī)律，尋找預(yù)防糖尿病性骨質(zhì)疏松的早期干預(yù)時(shí)機(jī)，同時(shí)觀察1型糖尿病對(duì)成骨細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)錄因子Runx2和Osterix基因和蛋白表達(dá)水平的影響，以期為臨床上防治骨質(zhì)疏松癥提供理論依據(jù)。
　　 方法：
　　 1、模型制作和動(dòng)物分組
　　 選用6-8周齡、平均體質(zhì)量（200±20）g的雌性Wistar大鼠50只，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)

2、分為實(shí)驗(yàn)組(n=30)和對(duì)照組（C組，n=20）。實(shí)驗(yàn)組大鼠禁食12h后一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin，STZ)60mg/kg制作1型糖尿病大鼠模型，觀察大鼠是否出現(xiàn)多尿、多飲、多食、行動(dòng)遲緩等，72h后測(cè)定大鼠隨機(jī)血糖均≥16.7mmol/L為造模成功。從造模成功大鼠中隨機(jī)選擇20只進(jìn)入實(shí)驗(yàn)，即為糖尿病模型組（D組）。
　　 2、指標(biāo)測(cè)定
　　 根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要每組分別于造模成功后第1w、3w、5w

3、、8w各取5只大鼠，測(cè)定隨機(jī)血糖后處死，取右側(cè)股骨并剔除附著的軟組織，采用RT-PCR和Westernblot檢測(cè)右側(cè)股骨Runx2和OsterixmRNA和蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：
　　 實(shí)驗(yàn)組共有23只大鼠符合成模標(biāo)準(zhǔn)。實(shí)驗(yàn)期間，成模大鼠死亡2只。與C組相同時(shí)間點(diǎn)相比，D組大鼠血糖升高、體質(zhì)量降低，差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)，且D組大鼠體質(zhì)量呈現(xiàn)先降低后升高然后再降低的趨勢(shì)。RT-PCR結(jié)果顯示，與C組

4、相比，D組大鼠骨組織中Runx2和OsterixmRNA表達(dá)于造模后第1w開(kāi)始明顯下調(diào)(P＜0.01)，在之后的第3w、5w、8w時(shí)，Runx2和OsterixmRNA表達(dá)均下調(diào)(P＜0.01)。Westernblot結(jié)果顯示，與C組相比，D組大鼠骨組織中Runx2和Osterix的蛋白表達(dá)水平于造模后第3w開(kāi)始顯著下降(P＜0.01)，在造模后第5w、8w時(shí)，D組大鼠骨組織中Runx2和Osterix的蛋白表達(dá)水平均顯著降低(P＜0.

5、01)，并且隨時(shí)間的延長(zhǎng)其蛋白的表達(dá)量呈下降的趨勢(shì)。
　　 結(jié)論：
　　 1、一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)60mg/kg能顯著誘導(dǎo)大鼠血糖升高、糖尿病癥狀明顯，成功建立1型糖尿病大鼠模型。
　　 2、在糖尿病性骨質(zhì)疏松大鼠的骨組織中，調(diào)控成骨分化的Runx2和Osterix的mRNA和蛋白表達(dá)水平均顯著下降，骨形成降低。
　　 3、Runx2和Osterix的蛋白表達(dá)水