雄海馬孵化袋cDNA文庫的EST分析以及海馬假定蛋白酶抑制劑基因的表達與性質鑒定.pdf

1、對文庫中發(fā)現(xiàn)一個WAP結構域蛋白基因進行結構與功能的分析和研究,并用原核表達的方法獲得重組蛋白,以期對孵化袋內(nèi)的功能蛋白獲得更多的了解,并試圖開發(fā)該蛋白潛在功能使其獲得更大的利用.應用SMART<'TM> cDNA Library Construction技術.以雄性大海馬孵化袋為原始材料,構建以真核表達載體pcDNA3為基礎的孵化袋cDNA文庫.通過對1975個隨機克隆的序列測定和生物信息學分析,獲得了951個新的基因序列,包括156

2、個cluster和795個singleton.其中有大量的小分子結合與運輸?shù)鞍谆颉⑾忍烀庖呦嚓P蛋白基因以及孵化相關酶類、胚胎發(fā)生相關蛋白轉錄子,這些EST的分布從一個側面反應了孵化袋的生物功能,為孵化袋是一個雄性親體上的類子宮器官提供了分子生物學上的佐證.孵化袋cDNA文庫的成功構建以及對其中所得基因的進一步功能研究,將為海馬雄性孵化行為提供更多的信息,為從分子水平找到海馬雄性孵化的進化理由與選擇壓力提供新的思路和線索.通過對海馬cD

3、NA文庫的隨機測序和分析,得到一個501bp的編碼一個全新的WAP結構域蛋白的全長cDNA序列.它的讀碼框編碼167個氨基酸殘基的前體蛋白,編碼24個氨基酸殘基的信號肽和143個氨基酸殘基的成熟蛋白.BLAST結果表明,該cDNA與溪紅點鮭魚(Salvelinus fontinalis)的排卵蛋白前體具有明顯的同源性,蛋白質序列同源性有57％左右.序列分析表明,該蛋白由于具有明顯的WAP結構域而應該屬于WAP結構域家族蛋白.WAP結構域

4、家族蛋白是一類組織來源廣泛,功能多樣的大家族,在已經(jīng)鑒定功能的該家族蛋白中,大多數(shù)具有絲氨酸蛋白酶抑制劑活性和細胞增值的調節(jié)作用,故將該蛋白命名為假定蛋白酶抑制劑(hkHPI).由Blast結果還可以看出,從海馬文庫中找到的WAP結構域家族蛋白新成員hkHPI除了結構域骨架氨基酸與WAP家族成員具有較高的相似性以外,其余氨基酸缺乏同源性,這一點上與該家族其他成員之間的特征相吻合,暗示hkHPI除了可能具有潛在的蛋白酶抑制劑功能外還有其他