Beclin1對(duì)雌激素受體陽(yáng)性乳腺癌的三苯氧胺敏感性和預(yù)后的影響及相關(guān)機(jī)制.pdf

1、研究背景:
　　乳腺癌是女性最為常見(jiàn)的惡性腫瘤，其中70％為雌激素受體(ER)陽(yáng)性的患者。以三苯氧胺等為代表的內(nèi)分泌治療是ER陽(yáng)性的乳腺癌最有效的治療方法之一，然而耐藥情況的發(fā)生使乳腺癌患者難以從中獲益。Beclin1在疾病中的作用往往歸咎于其在自噬中的重要表現(xiàn)，然而除此以外，因Beclin1是Vps34/PI3KC3復(fù)合物的核心成員，它在調(diào)控膜轉(zhuǎn)運(yùn)事件中也有重要作用。Beclin1在調(diào)節(jié)眾多腫瘤細(xì)胞的生存和死亡中發(fā)揮了重要作用，

2、但其在ER陽(yáng)性乳腺癌中的作用仍然未知。
　　研究目的:
　　研究Beclin1對(duì)ER陽(yáng)性乳腺癌的三苯氧胺敏感性及預(yù)后的影響及相關(guān)機(jī)制。
　　研究方法與結(jié)果:
　　本課題使用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)乳腺癌組織標(biāo)本中Beclin1的表達(dá)，發(fā)現(xiàn)Beclin1在ER陽(yáng)性乳腺癌中的表達(dá)水平和人類(lèi)表皮生長(zhǎng)因子受體2（HER2）表達(dá)水平存在正相關(guān)(P＜0.01)，而與ER陽(yáng)性乳腺癌患者的總生存期存在負(fù)相關(guān)(P＜0.01)。通過(guò)生物

3、信息學(xué)方法（Kaplan Meier Plotter數(shù)據(jù)庫(kù)）發(fā)現(xiàn)，在經(jīng)三苯氧胺治療的ER陽(yáng)性乳腺癌患者中，Beclin1的表達(dá)與總生存期存在負(fù)相關(guān)(P＜0.05)。本課題通過(guò)體外細(xì)胞培養(yǎng)的方法建立了ER陽(yáng)性的人乳腺癌細(xì)胞系MCF-7的三苯氧胺耐藥株MCF-7R。采用Western Blot檢測(cè)發(fā)現(xiàn)在MCF-7R細(xì)胞中Beclin1和HER2的蛋白表達(dá)水平均高于MCF-7細(xì)胞。接下來(lái)，我們運(yùn)用siRNA瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的方法下調(diào)了MCF-7和MC

4、F-7R細(xì)胞中Beclin1的蛋白表達(dá)水平。進(jìn)一步的研究發(fā)現(xiàn)下調(diào)了Beclin1的MCF-7和MCF-7R細(xì)胞生長(zhǎng)能力有一定減弱而凋亡有一定的增加。更為有趣的是，下調(diào)了Beclin1的MCF-7和MCF-7R細(xì)胞對(duì)三苯氧胺的敏感性明顯高于對(duì)照組細(xì)胞，表現(xiàn)為在三苯氧胺作用下細(xì)胞體外增殖能力和克隆形成能力減弱，凋亡增加，細(xì)胞周期G0/G1期阻滯增加以及遷移、侵襲的能力減弱。接著采用Western Blot和qPCR的方法發(fā)現(xiàn)下調(diào)了Becli

5、n1的MCF-7和MCF-7R細(xì)胞中HER2的表達(dá)水平均低于轉(zhuǎn)染了陰性對(duì)照siRNA細(xì)胞。在三苯氧胺作用后，下調(diào)Beclin1的MCF-7和MCF-7R細(xì)胞HER2表達(dá)水平依舊低于對(duì)照組，此外，相對(duì)于轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照siRNA組的細(xì)胞，它們的磷酸化Akt和磷酸化ERK1/2的蛋白表達(dá)水平下調(diào)，凋亡蛋白caspase-3和PARP剪切體表達(dá)水平上調(diào)，抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)水平下調(diào)，而自噬相關(guān)蛋白LC3B的表達(dá)水平的變化不顯著。我們運(yùn)用慢病毒

6、介導(dǎo)RNA干擾MCF-7細(xì)胞中的Beclin1表達(dá)并建立了穩(wěn)定低表達(dá)Beclin1的細(xì)胞株MCF-7/Beclin1和對(duì)照細(xì)胞株MCF-7/V。我們發(fā)現(xiàn)與之前結(jié)果相似地，MCF-7/Beclin1相較于MCF-7/V的三苯氧胺敏感性較高而且HER2表達(dá)水平較低。我們運(yùn)用過(guò)表達(dá)質(zhì)粒上調(diào)MCF-7/Beclin1中的HER2表達(dá)，發(fā)現(xiàn)可以一定程度上逆轉(zhuǎn)MCF-7/Beclin1對(duì)三苯氧胺的相對(duì)高敏感性。在三苯氧胺作用下，相對(duì)于轉(zhuǎn)染陰性對(duì)照質(zhì)

7、粒的MCF-7/Beclin1細(xì)胞，過(guò)表達(dá)HER2的MCF-7/Beclin1體外增殖能力和克隆形成能力增加，細(xì)胞凋亡減少，細(xì)胞G0/G1期阻滯也相對(duì)減少。此外，在三苯氧胺作用下， MCF-7/Beclin1細(xì)胞過(guò)表達(dá)HER2后可以逆轉(zhuǎn)之前變化的磷酸化Akt和ERK1/2蛋白和凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平。
　　研究結(jié)論:
　　本課題發(fā)現(xiàn)ER陽(yáng)性乳腺癌組織中的Beclin1表達(dá)與HER2表達(dá)之間正相關(guān)，并與患者的預(yù)后負(fù)相關(guān)。首次提