新的雌激素受體(ER)相關(guān)核分子ERRF對(duì)ER陽(yáng)性乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)的調(diào)節(jié)作用及其分子機(jī)制研究.pdf

1、乳腺癌目前是在大城市中生活的女性中發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一，其致死率也比較高。近年來(lái)，隨著生活水平的提高、生活方式的改變，我國(guó)女性患者中乳腺癌的發(fā)病率逐年上升，并且其發(fā)病年齡有年輕化的趨勢(shì)，嚴(yán)重危害我國(guó)廣大女性的身心健康。因此，深入研究乳腺癌發(fā)生發(fā)展過(guò)程中的遺傳改變，闡明乳腺癌的發(fā)病主因及發(fā)病機(jī)理，開(kāi)發(fā)出針對(duì)乳腺癌的特異性診斷和預(yù)防分子標(biāo)志物以及治療靶分子有助于提高乳腺癌的防治，減少患者的痛苦，具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。雌激素及雌激素受體α(

2、ER)信號(hào)通路在正常乳腺上皮細(xì)胞分化的過(guò)程中發(fā)揮著重要作用，但同時(shí)也是乳腺癌細(xì)胞的增殖所需要的。ER功能怎樣從正常細(xì)胞中的促分化轉(zhuǎn)化為癌細(xì)胞中的促增殖，至今也還不清楚。
　　 基因ERRF(也被稱(chēng)作Clorf64/MGC24047)是一個(gè)在2002年被鑒定出的新的哺乳動(dòng)物基因。該基因編碼一個(gè)含有169個(gè)氨基酸的蛋白，但其功能尚不清楚。2006年，Sjoblom等人在11例乳腺癌中檢測(cè)到該基因的兩個(gè)錯(cuò)義突變，一個(gè)發(fā)生在一例原位癌中

3、(G222T/G52W)，另一個(gè)發(fā)生在HCC1395乳腺癌細(xì)胞系(G366T/G100W)。這些突變提示，ERRF在乳腺癌發(fā)生過(guò)程中發(fā)揮一定的作用。在此假說(shuō)的指導(dǎo)下，我們檢測(cè)了ERRF在乳腺癌的體細(xì)胞突變和在mRNA和蛋白水平的表達(dá)，并將表達(dá)的變化與乳腺癌的臨床病理特點(diǎn)做了相關(guān)分析。另外，我們還分析了ERRF在細(xì)胞增殖和腫瘤形成過(guò)程中的作用，并探索了ERRF的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果顯示，在79例乳腺癌樣品中，包括31株乳腺癌細(xì)胞

4、系和48例乳腺癌臨床樣本，僅有HCC1395細(xì)胞系具有一個(gè)突變(該突變與文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果相同)。另外，這些腫瘤樣品含有四個(gè)單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)(SNPs)。因此，ERRF在乳腺癌中很少發(fā)生突變。ERRF mRNA在永生化的乳腺上皮細(xì)胞系和大部分的雌激素受體陰性(ER-)的乳腺癌細(xì)胞系(13/19，68％)中幾乎不表達(dá)，而在絕大部分的雌激素受體陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞系(11/12，92%)中有不同程度的表達(dá)。在45例乳腺癌臨床樣本中，ERRF在17

5、例中的表達(dá)有所下調(diào)，在14例中表達(dá)不變，在另外14例中則有表達(dá)的上調(diào)。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析顯示，ERRF的mRNA表達(dá)與雌激素受體ER的水平呈現(xiàn)正相關(guān)(Chi-square test，P=0.002)。ERRF蛋白在乳腺癌臨床樣本中的表達(dá)與雌激素受體(ER)和孕激素受體(PR)呈正相關(guān)，與人表皮生長(zhǎng)因子受體2(HER2)則呈負(fù)相關(guān)。另外，ERRF的高表達(dá)與患者的良好預(yù)后相關(guān)。利用RNA干擾技術(shù)在ER陽(yáng)性的乳腺癌細(xì)胞系中對(duì)ERRF的表達(dá)進(jìn)行干擾，顯

6、著抑制了乳腺癌細(xì)胞在體外的增殖以及在裸鼠體內(nèi)的致瘤能力。為了進(jìn)一步研究ERRF在乳腺癌發(fā)生和發(fā)展過(guò)程中與雌激素受體之間存在的關(guān)系，我們改變了雌激素受體信號(hào)通路，對(duì)ERRF的應(yīng)答做了分析。同時(shí)也分析了ERRF的表達(dá)干擾對(duì)雌激素受體的影響。當(dāng)雌激素及其受體信號(hào)通路活性降低時(shí)，ERRF的表達(dá)上調(diào)；當(dāng)干擾ERRF表達(dá)時(shí)，ER的mRNA表達(dá)沒(méi)有變化，但其蛋白表達(dá)則降低。我們還采用酵母雙雜交技術(shù)篩選到了可能與ERRF相互作用的一些蛋白(RNF2和Z