肝癌微血管分化程度及微血管面積與超聲造影灌注參數(shù)相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：超聲造影(contrast-enhanced ultrasonography，CEUS)在對肝局灶性病變的診斷價(jià)值早已在世界范圍內(nèi)得到公認(rèn)并廣泛應(yīng)用于臨床[1-3]，其獨(dú)特的血池顯像特點(diǎn)保證了超聲造影劑只在形成有效管腔的微血管里循環(huán)，這就為定量分析微血管分化程度提供一種可能，對研究腫瘤血流動(dòng)力學(xué)及微循環(huán)具有極大價(jià)值。血管生成(angiogenesis)對于腫瘤發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移、預(yù)后及抗腫瘤治療方面都有較重要的影響[4，5]，一

2、直是腫瘤研究的熱點(diǎn)，然而對于腫瘤新生微血管分化程度，即有無形成穩(wěn)定的血管結(jié)構(gòu)，及有無有效血管腔方面的報(bào)道卻很少見，特別對于肝癌的研究更少見。微血管密度(microvessel density，MVD)是評價(jià)腫瘤血管生成的金標(biāo)準(zhǔn)[6-8]，而微血管面積(microvessel area,MVA)[9-11]近年來也成為評價(jià)腫瘤血管生成的新方法。本研究旨在探討超聲造影灌注參數(shù)與肝癌微血管分化程度及微血管面積的關(guān)系。
　　 目的：使用

3、超聲造影定量分析肝細(xì)胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)，探討超聲造影灌注參數(shù)與HCC微血管分化程度、微血管面積之間的相關(guān)性。
　　 方法：選擇在中山大學(xué)腫瘤醫(yī)院行手術(shù)切除并經(jīng)病理證實(shí)的肝細(xì)胞癌患者52例，術(shù)前行超聲造影檢查。入選病例均未經(jīng)過放、化療及手術(shù)治療，基礎(chǔ)顯像滿意。使用Sonoliver的超聲造影定量分析軟件對52例HCC的超聲造影圖像進(jìn)行脫機(jī)分析，獲得HCC病灶內(nèi)及周圍肝實(shí)質(zhì)的的灌注曲線及

4、相關(guān)參數(shù)：峰值強(qiáng)度(Maximum ofintensity，IMAX)，上升時(shí)間[Rise Time(from10％ to90％ of IMAX)，RT]，達(dá)峰時(shí)間(Time to peak，TTP)，平均通過時(shí)間(mean Trasit Time corresponding to thecenter of gravity，mTT)，上升斜率(Rise Slope，RS)，流出時(shí)間(Washout Time，WT)。微血管密度(Micr

5、ovessel density，MVD)方法是定量分析腫瘤血管生成最常用的方法。不同血管標(biāo)記物顯示腫瘤微血管不同類型及不同特點(diǎn)，CD34在分化微血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)(CD34+)，而CD31在分化及未分化微血管內(nèi)皮細(xì)胞中均表達(dá)(CD31+)[12，13]，因此定義未分化微血管為CD31陽性表達(dá)而CD34陰性表達(dá)的微血管(CD31+/CD34-)[14]；(SMA+)MVD代表成熟微血管數(shù)[15，16]。用血管內(nèi)皮免疫染色標(biāo)記物(CD31、

6、CD34)及周細(xì)胞標(biāo)記物(SMA)對連續(xù)組織切片分別染色。為排除微血管總數(shù)影響的偏倚，用分化及未分化微血管在全部微血管中所占比例來衡量微血管分化程度：即未分化微血管密度比[(CD31+/CD34-)MVD/CD31+MVD]、分化微血管密度比(CD34+MVD/CD31+MVD)及成熟微血管密度比(SMA+MVD/CD31+MVD)。應(yīng)用Image Pro Plus6圖像分析軟件計(jì)算微血管面積(microvessel area,MVA)

7、、微血管平均面積[17]。將所有病灶根據(jù)Edmondson病理分級[18，19]、微血管形態(tài)[20-22]分組，探討超聲造影灌注參數(shù)與微血管分化程度及微血管面積在各組內(nèi)組間的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 ⑴HCC中IMAX與分化微血管密度比呈正相關(guān)r=0.343，(Spearman相關(guān)檢驗(yàn),p＜0.05)。與未分化微血管密度比呈負(fù)相關(guān)r=-0.346，(Spearman相關(guān)檢驗(yàn),p＜0.05)。與CD34染色MVD呈正相關(guān)

8、r=0.347，(Spearman相關(guān)檢驗(yàn),p＜0.05)。三組不同病理分級的HCC的WT有顯著差異(Kruskal-Wallis Test，P＜0.05)，WT分別為33.41±8.31s(Ⅰ級)，16.47±3.92s(Ⅱ級)，12.17±5.34s(Ⅲ+Ⅳ級)，而IMAX、RT、TTP、mTT、RS、QOF的差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Kruskal-WallisTest，P＞0.05)。三組不同微血管形態(tài)的HCC的IMAX、RT、TT

9、P、mTT、RS、WT、QOF的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Kruskal-Wallis Test，P＞0.05)。HCC中灌注參數(shù)IMAX、RT、TTP、RS、WT與MVA、微血管平均面積無相關(guān)性(Spearman相關(guān)，P＞0.05)。
　　 ⑵根據(jù)Edmondson病理分級[18,19]將HCC分成三組：Ⅰ級11例，Ⅱ級22例，Ⅲ+Ⅳ級19例。CD31、CD34染色的MVD在各病理分級間分別為：Ⅰ級86.32±8.65、59.18±5

10、.22，Ⅱ級65.38±5.48、46.78±2.69，Ⅲ+Ⅳ級57.79±5.36、42.17±4.15，二者在各病理分級問均存在顯著差異(Kruskal-Wallis Test，p＜0.05)，即隨著病理分級由高到低，MVD逐級減少。成熟微血管數(shù)(SMA+MVD)、未分化微血管密度比[(CD31+/CD34-)MVD/CD31+MVD]、分化微血管密度比(CD34+MVD/CD31+MVD)及成熟微血管密度比(SMA+MVD/CD3

11、1+MVD)在各病理分級間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Kruskal-Wallis Test，p＞0.05)。但隨著病理分級由高到低，存在未分化微血管密度比減低，分化微血管密度比增加，成熟微血管密度增加的趨勢。根據(jù)微血管形態(tài)[20-22]分成三組：點(diǎn)、線型13例，中間型26例，環(huán)狀型13例；在各微血管形態(tài)分組間，CD31、CD34染色的MVD、成熟微血管數(shù)(SMA+MVD)存在顯著差異(Kruskal-Wallis Test，p＜0.05)，其中

12、在點(diǎn)、線型分別為76.34±6.10、56.66±4.33、28.62±2.55，中間型70.21±5.07、50.19±2.52、29.16±1.52，環(huán)狀型51.22±6.20、33.85±4.74、19.10±2.36。即MVD在點(diǎn)、線型最多，環(huán)狀型最少，而成熟微血管數(shù)在中間型最多，點(diǎn)、線型又多于環(huán)狀型。未分化微血管密度比[(CD31+/CD34-)MVD/CD31+MVD]、分化微血管密度比(CD34+MVD/CD31+MVD)

13、及成熟微血管密度比(SMA+MVD/CD31+MVD)在各微血管形態(tài)分組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Kruskal-Wallis Test，p＞0.05)，但存在一定趨勢：點(diǎn)、線型未分化微血管密度比最小，分化微血管密度比最大，環(huán)狀型反之，成熟微血管密度比在中間型最大，環(huán)狀型最小，點(diǎn)、線形居中。
　　 ⑶各病理分級間微血管平均面積差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Kruskal-Wallis Test，p＜0.05)，而MVA差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。隨著病理分

14、級由高到低，微血管平均面積逐級遞增。在各微血管形態(tài)分組間，MVA及微血管平均面積差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Kruskal-Wallis Test，p＜0.05)。MVA、微血管平均面積在點(diǎn)、線型最小，在環(huán)狀型最大。
　　 ⑷CD31、CD34染色MVD及成熟微血管數(shù)(SMA+MVD)與微血管平均面積成負(fù)相關(guān)，r分別是-0.65、-0.44，-0.75，(Spearman相關(guān)，p＜0.05)，與MVA無相關(guān)性。未分化微血管數(shù)比[(CD3

15、1+/CD34-)MVD/CD31+MVD]與MVA呈正相關(guān)，r=0.29，(Spearman相關(guān)，p＜0.05)；分化微血管數(shù)比(CD34+MVD/CD31+MVD)與MVA呈負(fù)相關(guān)，r=-0.29，(Spearman相關(guān)，p＜0.05)。
　　 結(jié)論：①超聲造影灌注參數(shù)對于預(yù)測HCC微血管分化程度及病理分級有一定意義，但無法預(yù)測微血管形態(tài)及微血管面積：IMAX在一定程度上能反映微血管的分化程度，但無法反映微血管成熟性；IMA