腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學研究.pdf

1、山東大學碩士學位論文腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學研究姓名：宋紹霞申請學位級別：碩士專業(yè)：流行病與衛(wèi)生統(tǒng)計學指導教師：王志玉畢振強20050512山東大學碩士掌位論文腎綜合征出血熱病毒基因序列分析與分子流行病學研究研究生：宋紹霞導師：王志玉教授畢振強主任醫(yī)師中文摘要目的從山東省嚙齒類等動物中鑒定漢坦病毒(HV)，陽性標本進行RT—PCR擴增，測定序列，與以往山東省Hv病毒株一起進行序列分析和分子流行病學研究。了解它們的同源

2、性和遺傳距離，掌握山東省不同地區(qū)腎綜合征出血熱(HFRS)的分布特征，遺傳規(guī)律，進化關系；找出山東省的代表株，克隆其M基因。為從根本上預防和控制HFRS在山東省的流行打下堅實基礎并為研制HFRS特異診斷試劑和新型疫苗提供科學依據(jù)。，方法采集山東省不同地區(qū)的鼠肺標本，應用間接免疫熒光法(IFA)鑒定出HV感染的陽性標本。根據(jù)GenBankIIVM基因保守序列及相關參考文獻應用Primer5軟件設計HTN與SEO型通用引物及將HTN型(I型

3、)和SEO型(II型)分型的型特異性引物。通過RTPCR法擴增陽性標本中FlYM片段部分基因，測序并用DNASTAR軟件進行同源序列比較并構建系統(tǒng)發(fā)生樹。觀察山東省IIV堿基變異情況，找出山東省的代表株，進行全M片段擴增并構建克隆載體。測序并用BLAST軟件進行同源序列比較，觀察核苷酸以及所推導的氨基酸變異情況；利用SignalP、DNASTAR和TmPred軟件預測其信號肽序列、疏水區(qū)、抗原區(qū)及跨膜區(qū)，分析氨基酸變異對HV包膜糖蛋白生