博萊霉素致肺纖維化大鼠支氣管肺泡灌洗液中蛋白C系統(tǒng)的研究.pdf

1、目的:肺纖維化(pulmonary fibrosis,PF)是一種慢性間質性肺病,早期病理改變?yōu)榉闻菅?隨著時間延長,纖維化逐漸加重,肺功能逐漸減退。預后非常差。有關間質性肺疾病的病因及發(fā)病機制目前仍未闡明,近年來研究發(fā)現(xiàn),凝血系統(tǒng)的異常變化可能參與了間質性肺疾病患者肺纖維化的過程。本實驗旨在觀察博萊霉素致肺纖維化大鼠支氣管肺泡灌洗液(BALF)中蛋白C(PC)、活化蛋白C-蛋白C抑制劑復合物(APC-PCI),血清中Ⅲ型前膠原(PCⅢ

2、)的含量,探討PC系統(tǒng)活性成分的變化及其對肺內凝血活性的升高及肺纖維化形成的影響。
　　 方法:選擇體重230g±10g SD清潔級健康雄性大鼠(河北省實驗動物中心提供)48只,隨機分為博來霉素(BLM)組和生理鹽水對照組,每組各24只。博萊霉素組用10％水合氯醛(5mg/kg)腹腔內注射麻醉后,在無菌操作下作頸部正中切口,暴露氣管,經穿刺向氣管內注入博萊霉素(5mg/kg),于造模后3天、7天、14天、和28天各隨機處死6只。

3、對照組在同樣條件下以同樣方法向氣管內注入等量的生理鹽水(1.25ml/kg),于造模后3天、7天、14天、28天各隨機處死6只。兩組動物分別腹主動、靜脈放血處死,收集血清保存到-70℃冰箱中待測Ⅲ型前膠原的含量。用4℃無菌生理鹽水對左肺行肺泡灌洗,離心后保存到-70℃冰箱中備用。測定支氣管肺泡灌洗液中蛋白C(PC)、活化蛋白C-蛋白C抑制劑復合物(APC-PCI)的含量。右肺下葉置于10％的中性福爾馬林中固定,行常規(guī)病理切片,HE染色,

4、觀察肺內炎癥,Masson染色,觀察肺內膠原,并進行Szapiel病理分級,觀察肺泡炎和肺纖維化的動態(tài)變化。實驗結果及數據資料采用SPSS軟件進行統(tǒng)計學分析。
　　 結果:
　　 1大鼠支氣管肺泡灌洗液中蛋白C含量的變化:生理鹽水對照組各時間點灌洗液中的蛋白C含量間無顯著性差異(P＞0.05)。博萊霉素組BALF中蛋白C含量3天時下降,為3.966±0.684,7天時下降最為明顯,為1.423±0.799,與對照組比較均

5、有顯著性差異(P＜0.01),14天較7天有所升高,為5.085±0.728,與對照組比較亦有顯著性差異(P＜0.05),28天為6.031±0.574,與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 2大鼠支氣管肺泡灌洗液中活化蛋白C-蛋白C抑制劑復合物(APC-PCI)含量的變化:生理鹽水對照組各時間灌洗液中活化蛋白C-蛋白C抑制劑復合物的含量間無顯著性差異(P＞0.05),博萊霉素組BALF中蛋白C含量3天時下降,為55

6、.855±8.555,7天時下降最明顯,為31.971±8.296,與對照組比較均有顯著性差異(P＜0.05,P＜0.01),14天較7天有所升高,為58.608±6.599,與對照組比較亦有顯著性差異(P＜0.05),28天為69.348±9.313,與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 3大鼠血清中Ⅲ型前膠原的含量的變化:生理鹽水對照組各時間點Ⅲ型前膠原的濃度間無顯著性差異(P＞0.05),博萊霉素組血清中Ⅲ型前

7、膠原含量3天時有所升高,為31.804±5.155,但與對照組比較無顯著性差異,7天時升高較明顯,為44.209±7.299,與對照組比較有顯著性差異(P＜0.01),14天較7天有所下降,為33.941±4.384,與對照組比較亦有顯著性差異(P＜0.05),28天降至約正常水平,為30.239±6.811,與對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)。
　　 且Ⅲ型前膠原水平與活化蛋白C-蛋白C抑制劑復合物水平呈線性負相關(r=

8、-0.633,P＜0.01)。Ⅲ型前膠原水平與蛋白C水平亦呈線性負相關(r=-0.455,P＜0.05)。
　　 結論:
　　 1肺間質纖維化存在血液的高凝狀態(tài)。在肺泡炎期,支氣管肺泡灌洗液中的抗凝活性下降;在肺纖維化期,抗凝活性無明顯改變。即凝血活性的異常主要存在于肺泡炎階段。
　　 2肺內凝血活性的改變與肺內膠原代謝的活動性及肺纖維化的形成相關。PC系統(tǒng)活性的下降及PCⅢ水平的升高提示PC途徑作用的減弱與凝血