血管內(nèi)皮細胞在博萊霉素致肺纖維化中的作用研究.pdf

1、目的PF是一組由多種病因所引起的肺破壞性疾病.一旦形成將不可逆地導(dǎo)致嚴(yán)重的呼吸循環(huán)功能障礙,成為威脅生命的重要因素.因此,加深PF機制,尤其是早期階段的認(rèn)識,已成為更加迫切的需要.該研究首次從PF起始及進展過程中可能其最為關(guān)鍵作用的EC及結(jié)構(gòu)、功能異常的分子機制來探討,力圖闡明PF始動機制從而為其早期診治PF提供新的思路和理論依據(jù).方法1 BLM致PF模型大鼠和正常對照組大鼠經(jīng)戊巴比妥鈉深麻醉狀態(tài)下自肺尖至肺底行螺旋CT掃描,對感興趣區(qū)

2、追加HRCT掃描.進行CT掃描后,腹腔注射肝素(400U/kg)剖腹,經(jīng)髂靜脈內(nèi)手推760g.L-1泛影葡胺2ml,采用數(shù)字化X線機進行肺血管造影檢查.采用ELASA法測定血清vWf水平,待測標(biāo)本加酶標(biāo)抗體及底物終止反應(yīng)后在酶標(biāo)儀492nm處比色,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線得出相應(yīng)的vWf百分含量.BLM致PF模型實驗組和正常對照組大鼠肺組織標(biāo)本的采用PASM-M法制備BLM纖維化肺組織基底膜染色,觀察肺血管EC基底膜.2 BLM氣管內(nèi)滴注(4mg.

3、ml-1,5mg.kg-1)制作大鼠肺損傷模型分為3、7、14、28 d組,對照組在同樣條件下氣管內(nèi)注入相同數(shù)量的生理鹽水,方法同實驗組.分別行肺組織標(biāo)本HE染色和透射電鏡、VEGF、Flt、KDR/Flk免疫組織化學(xué)染色.BLM致PF模型大鼠EC,經(jīng)體外培養(yǎng)后分別與上述相同時間采用FCM測定其增殖活性.3采用組織塊法體外培養(yǎng)大鼠肺微血管內(nèi)皮細胞,在其中分別轉(zhuǎn)染正義VEGF cDNA基因及空白質(zhì)粒載體,然后采用RT-PCR技術(shù)測定上述轉(zhuǎn)