抗肺纖顆粒對博來霉素致大鼠肺纖維化模型支氣管肺泡灌洗液中PDGF-BB及TNF-α表達的干預(yù).pdf

1、目的：通過觀察中藥抗肺纖顆粒對博來霉素致肺纖維化大鼠支氣管肺泡灌洗液（BALF）中血小板源性生長因子BB（platelet—derived growth factor—BB，PDGF—BB）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor—α，TNF—α）、細胞計數(shù)及分類表達的干預(yù)，以及肺組織病理變化、羥脯氨酸（HYP）含量的影響，探討抗肺纖顆粒治療肺纖維化的作用機制，為抗肺纖顆粒臨床治療肺纖維化提供實驗依據(jù)。 方法：

2、將45只健康雌性SD大鼠（體重190—210g/只），采用隨機數(shù)字表法分為3組：生理鹽水對照組（N組），博來霉素模型組（M組），抗肺纖顆粒組（K組），每組15只。具體方法：（1）N組：氣管內(nèi)注入0.9%N.S0.2ml（1ml/kg體重）隨后每日給予胃內(nèi)灌入0.9% N.S4ml進行干預(yù)；（2）M組：氣管內(nèi)灌注博來霉素（5mg/kg），用生理鹽水配制博來霉素溶液，（濃度為5mg/ml）誘導(dǎo)肺纖維化，隨后每日用0.9% N.S（劑量與用法

3、同N組）進行干預(yù)；（3）K組：氣管內(nèi)注入博來霉素（劑量與用法同M組），隨后開始給予抗肺纖顆粒（1g/100g/日，溶于0.9% NS4ml中）灌胃進行干預(yù)。各組動物于氣管內(nèi)灌注后第7、14和28天分別處死5只大鼠，收集左肺組織并使用4%多聚甲醛固定，石蠟包埋切片行H及Masson染色，觀察肺組織病理變化、判斷肺泡炎及肺纖維化程度，肺組織勻漿測定羥脯氨酸含量，右肺支氣管肺泡灌洗收集支氣管肺泡灌洗液，進行細胞分類、計數(shù)，以及用酶聯(lián)免疫吸附實

4、驗法（ELISA法），測定支氣管肺泡灌洗液上清液中PDGF—BB及TNF—α的含量。 結(jié)果：（1）病理切片觀察N組：肺泡腔內(nèi)未見炎性細胞浸潤，肺泡間隔無增寬；M組：HE染色顯示，第7天時肺泡炎最重，肺泡腔和肺間質(zhì)內(nèi)可見大量炎性細胞浸潤，14天時肺泡腔內(nèi)炎癥細胞明顯減少，成纖維細胞增多，膠原明顯增多，肺泡結(jié)構(gòu)破壞，肺泡隔增寬，28天肺纖維化程度明顯加重，肺泡間隔明顯增寬，肺泡腔明顯縮小，部分肺泡腔塌陷消失，膠原纖維較前增多；Mas

5、son染色鏡下觀察：出現(xiàn)被染為藍色的膠原纖維明顯增多，肺泡腔幾乎消失，由片狀膠原纖維和成纖維細胞占據(jù)，形成嚴重的肺纖維化。K組各時間點肺泡炎及纖維化程度均較M組輕。評分分析示：K組肺泡炎和纖維化程度明顯低于同期M組，與M組比較有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；（2）支氣管肺泡灌洗液中細胞計數(shù)及分類，M組及K組BALF中細胞總數(shù)在第7天達到高峰，在第14天開始回降，各組與N組比較，細胞總數(shù)增多，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；K組7天

6、、14天組與M組相應(yīng)時間點比較細胞總數(shù)減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；各組與N組比較，肺泡巨噬細胞雖比例降低，但絕對數(shù)增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義； K組7天、14天組與M組相應(yīng)時間點比較肺泡巨噬細胞比例升高但絕對值下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意（P<0.05）；各組與N組比較，中性粒細胞比例均增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）.K組7天、14天組與M組相應(yīng)時間點比較，中性粒細胞比例及絕對值均減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）：各組與N

7、組相應(yīng)時間點比較，淋巴細胞比例均增加，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），K組7天、14天組與M組相應(yīng)時間點比較淋巴細胞比例及絕對值均下降，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；第28天各組BALF中細胞總數(shù)及分類與N組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05）（3）肺組織羥脯氨酸含量測定M組第7天大鼠肺組織羥脯氨酸含量開始增高，第14天、28天，大鼠肺組織羥脯氨酸含量進行性增高，都明顯高于N組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.01）；K組肺組織中脯

8、氨酸含量在第7天，14天和28天均低于M組，差異有顯著統(tǒng)計學(xué)意義P<0.01）；（4）支氣管肺泡灌洗液中PDGF—BB、TNF—α的測定：N組BALF中PDGF—BB的表達含量低，且第7、14、28天無明顯變化，M組的肺泡灌洗液中的PDGF—BB含量早期升高明顯（第7天），后迅速下降，K組第7、14、28天的PDGF—BB含量均低于M組；K組第7、14天BALF中PDGF—BB含量低于M組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），第28天K組

9、的BALF中PDGF—BB水平與M組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P>0.05），K組第7、14、28天BALF中TNF—α含量低于M組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。K組、M組BALF中TNF—α、PDGF—BB水平于各時間點均明顯高于N組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。 結(jié)論：1.肺纖維化模型組和抗肺纖顆粒組與正常對照組比較：支氣管肺泡灌洗液中的細胞總數(shù)增加，巨噬細胞比例雖下降，但絕對數(shù)增加，而中性粒細胞、淋巴細胞比例明顯增

10、加。提示巨噬細胞、中性粒細胞、淋巴細胞均參與了肺損傷和肺纖維化，而抗肺纖顆粒能夠減少肺泡巨噬細胞、中性粒細胞及淋巴細胞的滲出，減輕早期的肺泡炎； 2.抗肺纖顆粒組BALF中細胞因子PDGF—BB和TNF—α的含量在各個時間點較模型組下降，推測該藥物可能抑制PDGF—BB和TNF—α的表達，從而減少肺組織中膠原的沉積，起到其抗肺纖維化的作用； 3.抗肺纖顆粒能明顯降低肺組織中羥脯氨酸的含量，因此可降低肺組織膠原蛋白的含量，