C3轉(zhuǎn)移酶聯(lián)合雪旺細(xì)胞修復(fù)脊髓損傷的實驗研究.pdf

1、目的：
　　 探討C3轉(zhuǎn)移酶聯(lián)合雪旺細(xì)胞(schwann cells,SCs)尾靜脈移植治療大鼠脊髓損傷(spinal cord injury,SCI)的療效。
　　 方法：
　　 SPF級雌性Wistar大鼠,體重50±10g,脫頸處死后取雙側(cè)坐骨神經(jīng),顯微鏡下抽出神經(jīng)束,采用植塊法培養(yǎng)、傳代、純化,S-100染色鑒定雪旺細(xì)胞,移植前一天用Hoechst33342標(biāo)記雪旺細(xì)胞。SPF級Wistar雌性大鼠60只

2、,體重220±10g,利用Impactor model-Ⅱ打擊儀垂直打擊(10g×25 mm),建立胸10(T10)脊髓損傷模型,造模成功后隨機分為4組:單純DMEM空白對照組(A組)、單純C3移植組(B組)、單純雪旺細(xì)胞移植組(C組)C3聯(lián)合雪旺細(xì)胞移植組(D組)；單純DMEM空白對照組(A組):損傷后1周尾靜脈注射DMEM1ml；單純C3移植組(B組):損傷后立即和術(shù)后3天分別局部注射C3轉(zhuǎn)移酶10μl；單純雪旺細(xì)胞移植組(C組):

3、損傷后1周尾靜脈移植雪旺細(xì)胞1ml(1×106)；C3聯(lián)合雪旺細(xì)胞移植組(D組):損傷后立即和術(shù)后3天局部分別注射C3轉(zhuǎn)移酶10μl,損傷后l周尾靜脈移植雪旺細(xì)胞1ml(1×106)。術(shù)前1d、術(shù)后1d、3d、1w及以后每周進(jìn)行BBB評分、腳印分析行為學(xué)評價損傷后大鼠后肢功能恢復(fù)情況。細(xì)胞移植后1、2、4周各組分別取材行冰凍切片觀察移植細(xì)胞的遷移情況。損傷后12周行葡聚糖胺(biotin-dextran amine,BDA)順行示蹤皮質(zhì)

4、脊髓束,2周后取出實驗動物損傷段脊髓,行快速冰凍切片觀察神經(jīng)纖維再生情況。移植后13周取材行常規(guī)HE染色,免疫熒光染色觀察損傷段神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuronspecific enolase,NSE)、膠質(zhì)原纖維酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 組織塊培養(yǎng)第3天見少量雪旺細(xì)胞遷出,1周后可見植塊周邊有大量細(xì)胞遷出,經(jīng)純化、S-100染色鑒

5、定,獲得雪旺細(xì)胞的純度達(dá)95％。移植后1、2、4周損傷段及鄰近節(jié)段脊髓內(nèi)可觀察到Hoechst33342陽性細(xì)胞。術(shù)前所有實驗動物雙后肢BBB評分均為21分,術(shù)后1、3d BBB評分0-1分,隨后BBB評分逐漸上升,至損傷后13周實驗結(jié)束時D組最高評分達(dá)13分左右。術(shù)后第4周C、D組與A組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05),第5周各組組間差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05):術(shù)后9周B、C、D組組間腳印分析結(jié)果差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.

6、05)。HE染色示損傷后2周時各組均有空洞形成,B、C、D組損傷區(qū)空洞面積小于A組。免疫熒光染色示,A組GFAP反應(yīng)最強,損傷區(qū)空洞明顯可見,范圍大于其它三組,D組GFAP陽性面積明顯小于其它實驗組(p<0.05):B、C、D組NSE陽性面積與A組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；C組和D組脊髓損傷區(qū)及其遠(yuǎn)端可見BDA標(biāo)記的神經(jīng)纖維通過損傷區(qū)域。
　　 結(jié)論：
　　 靜脈移植的雪旺細(xì)胞能夠通過血脊髓屏障向脊髓損傷區(qū)