殼聚糖導(dǎo)管聯(lián)合嗅鞘細(xì)胞移植修復(fù)大鼠脊髓損傷的研究.pdf

1、第一部分 嗅鞘細(xì)胞的原代培養(yǎng)及純化和形態(tài)學(xué)觀察
　　 實(shí)驗(yàn)一：新生大鼠嗅鞘細(xì)胞的原代培養(yǎng)及形態(tài)學(xué)觀察
　　 目的：探討新生大鼠嗅鞘細(xì)胞的原代培養(yǎng)及純化方法并對(duì)其形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行觀察。
　　 方法：分離培養(yǎng)新生大鼠嗅球中的嗅鞘細(xì)胞，聯(lián)合應(yīng)用差速貼壁法和阿糖胞苷抑制法進(jìn)行純化，NGFRp75免疫組化染色鑒定細(xì)胞。
　　 結(jié)果：可獲得較高純度的嗅鞘細(xì)胞，其形態(tài)主要為雙極，多極和無(wú)突起的“油煎蛋”形，細(xì)胞突起細(xì)長(zhǎng)并

2、交織成網(wǎng)狀。
　　 結(jié)論：該方法步驟簡(jiǎn)便，可重復(fù)性好，具有較高的實(shí)用價(jià)值。
　　 實(shí)驗(yàn)二：成年大鼠與新生鼠嗅鞘細(xì)胞形態(tài)學(xué)和生長(zhǎng)特性差異的研究
　　 目的：對(duì)成年大鼠和新生鼠嗅鞘細(xì)胞的形態(tài)學(xué)和生長(zhǎng)特征的差異進(jìn)行觀察。
　　 方法：使用相同培養(yǎng)純化方法分別培養(yǎng)成年大鼠和新生鼠嗅球表層中的嗅鞘細(xì)胞，NGFRp75免疫組化染色鑒定細(xì)胞并觀察不同時(shí)期兩者嗅鞘細(xì)胞的形態(tài)差異和生長(zhǎng)速度。
　　 結(jié)果：均可獲得較

3、高純度的嗅鞘細(xì)胞，但兩類(lèi)細(xì)胞在生長(zhǎng)特征和形態(tài)學(xué)上略有差異。
　　 結(jié)論：成年大鼠和新生鼠嗅鞘細(xì)胞形態(tài)學(xué)和生長(zhǎng)特征有差異。
　　 第二部分：殼聚糖的生物相容性研究
　　 實(shí)驗(yàn)一：殼聚糖與大鼠嗅鞘細(xì)胞生物相容性的研究
　　 目的：研究殼聚糖與大鼠嗅鞘細(xì)胞的生物相容性。
　　 方法：將大鼠嗅鞘細(xì)胞接種至殼聚糖包被的培養(yǎng)板上共同培養(yǎng)，觀察嗅鞘細(xì)胞在膜上的形態(tài)及生長(zhǎng)增殖情況，并與對(duì)照組相比較。
　　

4、 結(jié)果：嗅鞘細(xì)胞可在殼聚糖膜上貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞形態(tài)及數(shù)量與空白對(duì)照組相比無(wú)顯著差異，但與賴(lài)氨酸包被組相比細(xì)胞數(shù)量偏低。
　　 結(jié)論：嗅鞘細(xì)胞與殼聚糖有良好的生物相容性。
　　 實(shí)驗(yàn)二：殼聚糖膜在大鼠脊髓組織的降解與生物相容性研究
　　 目的：研究殼聚糖膜在大鼠脊髓組織的降解與生物相容性。
　　 方法：將36只SD大鼠隨即分為實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組，將殼聚糖膜和醫(yī)用絲線分別植入脊髓組織，于術(shù)后7，14，28天測(cè)定殼聚

5、糖膜的重量并評(píng)估局部組織炎性反應(yīng)。
　　 結(jié)果：殼聚糖膜的降解率分別為14.8[％]，18.9[％]，25.0[％]，殼聚糖膜和醫(yī)用絲線在植入局部引發(fā)的炎癥反應(yīng)類(lèi)似。
　　 結(jié)論：殼聚糖膜易于降解并與脊髓組織有良好的生物相容性，是一種可應(yīng)用于脊髓損傷修復(fù)的新型生物材料。
　　 第三部分：殼聚糖導(dǎo)管聯(lián)合嗅鞘細(xì)胞移植修復(fù)大鼠脊髓損傷的研究
　　 目的：研究殼聚糖導(dǎo)管聯(lián)合嗅鞘細(xì)胞(OEC)移植對(duì)SD大鼠脊髓損傷

6、的修復(fù)作用。
　　 方法：原代培養(yǎng)新生SD大鼠嗅鞘細(xì)胞并建立脊髓損傷動(dòng)物模型，將殼聚糖導(dǎo)管和OECs植入脊髓損傷處(實(shí)驗(yàn)組)，設(shè)立單純嗅鞘細(xì)胞移植組和單純殼聚糖導(dǎo)管植入組為實(shí)驗(yàn)對(duì)照A,B組，脊髓損傷+DMEM-F12培養(yǎng)基注射組為空白對(duì)照組。術(shù)后評(píng)估大鼠后肢運(yùn)動(dòng)功能恢復(fù)情況，分別于2，4，6，8周取材進(jìn)行組織學(xué)觀察。
　　 結(jié)果：嗅鞘細(xì)胞可在脊髓損傷局部存活并促進(jìn)軸突再生，殼聚糖導(dǎo)管可橋接脊髓兩斷端，對(duì)軸突再生提供支架作