膠原絲素蛋白支架聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植促進(jìn)脊髓損傷修復(fù)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　制備膠原/絲素蛋白支架，并檢測(cè)其生物相容性，建立大鼠脊髓損傷模型，觀察膠原/絲素蛋白支架聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植促進(jìn)大鼠脊髓損傷修復(fù)的療效。
　　方法：
　　本實(shí)驗(yàn)分三部分：1.制備絲素蛋白溶液和膠原，將二者以4:2的質(zhì)量比混合配制，利用冷凍干燥法制成支架，提自GFP小鼠的神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)過(guò)培養(yǎng)和傳代，被接種到該支架上，通過(guò)神經(jīng)干細(xì)胞特異性 Nestin抗體免疫熒光染色檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞的純度，利用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀

2、察NSCs在該支架上的生長(zhǎng)情況。2.選取成年雌性SD大鼠，約220g，利用顯微外科技術(shù)建立脊髓全橫斷模型，術(shù)后行 MRI、DTI及誘發(fā)電位檢測(cè)，證明大鼠 SCI模型建立成功。3.膠原/絲素蛋白支架聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植促進(jìn)大鼠脊髓損傷的修復(fù)，本實(shí)驗(yàn)分5組：A組為空白對(duì)照組，B組為單純損傷組，C組為脊髓損傷+膠原/絲素蛋白支架移植組，D組為脊髓損傷+神經(jīng)干細(xì)胞移植組，E組為脊髓損傷+接種有神經(jīng)干細(xì)胞的膠原/絲素蛋白支架移植組，術(shù)后利用 BBB

3、評(píng)分、斜坡實(shí)驗(yàn)、誘發(fā)電位、病理學(xué)和組織化學(xué)評(píng)價(jià)脊髓損傷后修復(fù)的程度。
　　結(jié)果：
　　1.膠原/絲素蛋白支架以4：2的質(zhì)量比混合制備，其孔隙率為94.6％±1.5%，吸水膨脹率為1501.6%±183.3%，彈性模量為（22.3±2.3）kpa，孔徑為（102±13）μm，光鏡和掃描電鏡都觀察到神經(jīng)干細(xì)胞在該支架上能夠存活，生長(zhǎng)。2.核磁共振 T1相示低信號(hào)，T2相示高信號(hào)，DTI圖像示脊髓離斷，以及運(yùn)動(dòng)和體感誘發(fā)電位示術(shù)后

4、大鼠雙下肢運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)功能障礙，證明大鼠脊髓損傷模型構(gòu)建成功。3.BBB評(píng)分示E組與對(duì)照組相比，運(yùn)動(dòng)功能的改善明顯優(yōu)于B組，組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），誘發(fā)電位顯示E組的MEP和SEP的潛伏期和振幅與B組相比，組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＜0.05），免疫熒光示E組存在NF、MBP、GFAP、PSD95、SYP和GAP43陽(yáng)性細(xì)胞存在，病理學(xué)檢測(cè)HE染色示局部存在含鐵血黃素、炎癥、吞噬細(xì)胞及增生膠質(zhì)，證明脊髓損傷后局部有所修復(fù)。