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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:
制備膠原/絲素蛋白支架,并檢測(cè)其生物相容性,建立大鼠脊髓損傷模型,觀察膠原/絲素蛋白支架聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植促進(jìn)大鼠脊髓損傷修復(fù)的療效。
方法:
本實(shí)驗(yàn)分三部分:1.制備絲素蛋白溶液和膠原,將二者以4:2的質(zhì)量比混合配制,利用冷凍干燥法制成支架,提自GFP小鼠的神經(jīng)干細(xì)胞經(jīng)過(guò)培養(yǎng)和傳代,被接種到該支架上,通過(guò)神經(jīng)干細(xì)胞特異性 Nestin抗體免疫熒光染色檢測(cè)神經(jīng)干細(xì)胞的純度,利用光學(xué)顯微鏡和掃描電鏡觀
2、察NSCs在該支架上的生長(zhǎng)情況。2.選取成年雌性SD大鼠,約220g,利用顯微外科技術(shù)建立脊髓全橫斷模型,術(shù)后行 MRI、DTI及誘發(fā)電位檢測(cè),證明大鼠 SCI模型建立成功。3.膠原/絲素蛋白支架聯(lián)合神經(jīng)干細(xì)胞移植促進(jìn)大鼠脊髓損傷的修復(fù),本實(shí)驗(yàn)分5組:A組為空白對(duì)照組,B組為單純損傷組,C組為脊髓損傷+膠原/絲素蛋白支架移植組,D組為脊髓損傷+神經(jīng)干細(xì)胞移植組,E組為脊髓損傷+接種有神經(jīng)干細(xì)胞的膠原/絲素蛋白支架移植組,術(shù)后利用 BBB
3、評(píng)分、斜坡實(shí)驗(yàn)、誘發(fā)電位、病理學(xué)和組織化學(xué)評(píng)價(jià)脊髓損傷后修復(fù)的程度。
結(jié)果:
1.膠原/絲素蛋白支架以4:2的質(zhì)量比混合制備,其孔隙率為94.6%±1.5%,吸水膨脹率為1501.6%±183.3%,彈性模量為(22.3±2.3)kpa,孔徑為(102±13)μm,光鏡和掃描電鏡都觀察到神經(jīng)干細(xì)胞在該支架上能夠存活,生長(zhǎng)。2.核磁共振 T1相示低信號(hào),T2相示高信號(hào),DTI圖像示脊髓離斷,以及運(yùn)動(dòng)和體感誘發(fā)電位示術(shù)后
4、大鼠雙下肢運(yùn)動(dòng)和感覺(jué)功能障礙,證明大鼠脊髓損傷模型構(gòu)建成功。3.BBB評(píng)分示E組與對(duì)照組相比,運(yùn)動(dòng)功能的改善明顯優(yōu)于B組,組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),誘發(fā)電位顯示E組的MEP和SEP的潛伏期和振幅與B組相比,組間具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.05),免疫熒光示E組存在NF、MBP、GFAP、PSD95、SYP和GAP43陽(yáng)性細(xì)胞存在,病理學(xué)檢測(cè)HE染色示局部存在含鐵血黃素、炎癥、吞噬細(xì)胞及增生膠質(zhì),證明脊髓損傷后局部有所修復(fù)。
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