血漿同型半胱氨酸水平，亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與強(qiáng)直性脊柱炎的相關(guān)性研究.pdf

1、研究背景：同型半胱氨酸(homocysteine，Hcy)是DNA甲基化修飾代謝的中間產(chǎn)物，其異常升高很可能影響DNA的甲基化過程，并進(jìn)而影響某些基因的表達(dá)而促進(jìn)疾病的發(fā)生發(fā)展。亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)是促使Hcy轉(zhuǎn)化的關(guān)鍵酶，在葉酸和Hcy代謝、DNA甲基化和DNA合成等方面起重要作用。體內(nèi)外研究表明，慢性葉酸或甲基缺乏與DNA甲基異常有關(guān)，并會(huì)造成DNA鏈斷裂、染色體重組改變和染色體分離異常。已有研究顯示：高Hcy血癥可能

2、導(dǎo)致基因組DNA低甲基化，而誘發(fā)某些風(fēng)濕免疫性疾病的產(chǎn)生。目前尚無強(qiáng)直性脊柱炎患者Hcy與基因組DNA甲基化水平的報(bào)道。 研究目的：檢測(cè)強(qiáng)直性脊柱炎(AS)患者Hcy水平，探討血漿同型半胱氨酸(Hcy)水平與AS間的聯(lián)系；分析AS患者M(jìn)THFR基因C677T突變的多態(tài)性，探討MTHFR基因多態(tài)性與AS的相關(guān)性，以尋求Hcy，MTHFR基因多態(tài)性及去甲基化在AS中可能的發(fā)病機(jī)制。 研究方法：運(yùn)用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定100例A

3、S患者及60名正常人血漿Hcy濃度，應(yīng)用多聚酶鏈反應(yīng)-限制性內(nèi)切酶片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)分析MTHFR基因的多態(tài)性。對(duì)有突變堿基的標(biāo)本進(jìn)行DNA測(cè)序分析。 結(jié)果： ①AS患者血漿Hcy濃度(17.91+/-3.17μmol/L)明顯高于對(duì)照組(11.97+/-2.14 μmol/L)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t'=14.121，P<0.001)。 ②AS組MTHFR C/C型、C/T型基因頻率分布與對(duì)

4、照組比較無顯著性差異(X2C/C=1.508，X2C/T=0.067，P>0.05)。 ③AS組MTHFR C、T等位基因頻率與對(duì)照組比較無顯著差異(X2=3.008，P>0.05)。 ④AS組MTHFR T/T型基因頻率分布與對(duì)照組比較有顯著差異(17％VS5％，X2T/T=4.937，P<0.05)。 ⑤AS組的MTHFR C/C、C/T、T/T基因型的Hcy水平均高于對(duì)照組的相同基因型(tC/C=8.042

5、;tC/T=8.315;tT/T=9.450，P<0.001);AS組和對(duì)照組MTHFRT/T型的血漿Hcy水平明顯高于同組內(nèi)MTHFR C/C型和MTHFR C/T型(t=10.279，P<0.001)，而同組內(nèi)MTHFR C/C型與MTHFR C/T型Hcy的水平比較無顯著差異(t=2.712，P>0.05)⑥Logistical回歸分析顯示高Hcy血癥是AS發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.001，OR=4.582，95％CI=1.98

6、4-10.585)。 ⑦PCR產(chǎn)物測(cè)序結(jié)果證實(shí)酶切分析的方法準(zhǔn)確，結(jié)果可信。 結(jié)論：AS患者血漿Hcy濃度明顯高于正常人，高Hcy血癥是AS發(fā)病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。MTHFR基因T/T型突變是血漿Hcy濃度升高的一個(gè)重要影響機(jī)制，MTHFR基因T/T型突變可能與AS的發(fā)生有相關(guān)性。AS患者的高Hcy血癥是否可導(dǎo)致某些DNA的低甲基化，以及Hcy對(duì)AS患者的MTHFR基因啟動(dòng)子甲基化修飾及其mRNA表達(dá)的影響，有待進(jìn)一步的研究