骨髓間充質(zhì)干細胞在組織工程皮膚中的應用.pdf

1、創(chuàng)傷后皮膚缺損是臨床最常見的病癥之一,僅靠創(chuàng)面自身難以實現(xiàn)皮膚的再生,需要足夠的皮膚替代物進行修復.開發(fā)具有生物活性的人工皮膚替代物,已成為治療創(chuàng)傷后皮膚缺損的重要策略.組織工程成功與否取決于以下三個關鍵性制約因素:種子細胞,支架材料以及有助于細胞生長、分化的外在環(huán)境.其中種子細胞一直是組織工程研究的核心問題,理想的種子細胞應該具有容易獲得、容易在體外培養(yǎng)增殖、長期傳代不改變生物學特性、抗原性小、組織修復能力強等特征.近年來干細胞的研究

2、發(fā)現(xiàn)骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)具備作為組織工程種子細胞的條件,并在組織工程骨的研制中被廣泛應用.但目前關于MSCs在皮膚缺損愈合中的作用鮮見報道.MSCs能否作為種子細胞應用于組織工程皮膚的構建?以其構建的組織工程皮膚能否促進皮膚缺損愈合?基于這一思路,本研究利用細胞培養(yǎng)技術、基因工程技術及組織工程技術,從構建組織工程皮膚的種子細胞入手,分離純化了MSCs,實現(xiàn)了其體外長期傳代及大量擴增,并對MSCs進行了EGF基因修飾.在此基礎上,

3、構建組織工程皮膚生物支架,進而將MSCs種植于生物支架材料上,與角質(zhì)形成細胞復合構建組織工程皮膚.體內(nèi)實驗結果表明,用MSCs作為種子細胞所構建組織工程皮膚對皮膚缺損具有顯著促愈作用,而MSCs經(jīng)EGF修飾后促愈作用更為明顯.本實驗主要結果及結論如下:1. 在綜合帖壁法和密度梯度離心法分離MSCs的基礎上,利用雙層過濾法對MSCs進行純化,優(yōu)化了MSCs分離純化方法.所得MSCs形態(tài)均一,細胞核原始,細胞器不發(fā)達;傳至25代未見老化現(xiàn)象

4、;體外增殖迅速;具有MSCs表面標志物;保持了向成骨及成脂分化的潛能,誘導分化后期成骨及成脂分化能力強于傳統(tǒng)密度梯度離心法所獲細胞.2. 制備的生物支架材料符合組織工程皮膚膠原多孔膜的最優(yōu)結構.3. 利用基因工程技術成功構建pcDNA3.1/EGF真核表達載體,完成對MSCs的基因修飾;在體外培養(yǎng)條件下實現(xiàn)EGF的穩(wěn)定高效釋放,達ng級,可促進MSCs增殖;對MSCs的生長及分化沒有影響.4. 利用組織工程技術成功構建組織工程皮膚,可以