骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在擴張皮膚內(nèi)遷移的實驗研究.pdf

1、目的：使用熒光染料標(biāo)記細(xì)胞回植的方法，研究骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在大鼠擴張皮膚模型中，經(jīng)皮下注射給藥后向皮膚全層遷移的現(xiàn)象，證明在皮膚擴張引起機械力刺激的條件下，細(xì)胞發(fā)生遷移現(xiàn)象。
　　 方法：⑴采用全骨髓貼壁培養(yǎng)法對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進行分離、純化。將細(xì)胞接種于含10％胎牛血清（FBS）的DMEM培養(yǎng)基中進行體外擴增、傳代，并觀察探索其合適的培養(yǎng)條件，以及各階段細(xì)胞狀態(tài)。在倒置顯微鏡下對所培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外生長進行形

2、態(tài)學(xué)觀察。⑵對體外培養(yǎng)的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞進行免疫表型鑒定，確定其為骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。⑶將皮膚擴張器埋置于大鼠背部皮下，注水，建立大鼠皮膚擴張模型。⑷將培養(yǎng)的第三代骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞使用氨甲基苯甲酰氨（CM-Dil）熒光染料標(biāo)記，皮下注射植入皮膚擴張模型中。⑸分別于細(xì)胞植入后1d，4d，7d取皮膚標(biāo)本，于免疫熒光顯微鏡下觀察植入的細(xì)胞遷移情況。⑹對發(fā)生遷移現(xiàn)象的皮膚標(biāo)本進行細(xì)胞DAPI染色，確定實驗結(jié)果。
　　 結(jié)果：運用全骨髓

3、貼壁培養(yǎng)法對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外進行培養(yǎng)擴增，表現(xiàn)出很強的增殖潛能。使用熒光染料氨甲基苯甲酰氨標(biāo)記細(xì)胞，標(biāo)記率可達(dá)90％。經(jīng)皮下注射給予的標(biāo)記細(xì)胞植入大鼠皮膚擴張模型后，于4d，7d的皮膚組織切片中可以觀察到細(xì)胞從注射部位向皮膚全層的遷移現(xiàn)象，而1d的皮膚組織切片結(jié)果無差異。對細(xì)胞進行DAPI染色，結(jié)果顯示陽性細(xì)胞于免疫熒光顯微鏡下觀察到的遷移細(xì)胞重合。
　　 結(jié)論：大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在體外可成功進行原代和傳代培養(yǎng)，體外