全反式維甲酸在肺癌細(xì)胞中的作用機(jī)制.pdf

1、肺癌目前是中國(guó)惡性腫瘤發(fā)病率和死亡率較高的疾病。近年來(lái),其發(fā)病率仍然在不斷上升。世界衛(wèi)生組織(World Health Organization,WHO)預(yù)測(cè),到2025年,中國(guó)每年新增的肺癌病死例數(shù)將超100萬(wàn)。肺癌患病人數(shù)將居世界之首,而且是預(yù)后效果最差的惡性腫瘤之一。而目前,非小細(xì)胞肺癌(Non-Small CellLung Cancer,NSCLC)的治療仍不盡如人意,主要是局部的浸潤(rùn)和遠(yuǎn)處的轉(zhuǎn)移,仍不能依靠手術(shù)切除完全治愈。即

2、使處于早期的肺癌患者,經(jīng)過(guò)手術(shù)切除后,也經(jīng)常有復(fù)發(fā)的情況產(chǎn)生。雖然經(jīng)過(guò)醫(yī)學(xué)專家?guī)资甑呐?肺癌患者總的5年生存率在美國(guó)不到15％,中國(guó)則更低。
　　 現(xiàn)今晚期肺癌患者的治療,主要的方法仍然是化療,并且對(duì)于術(shù)后患者也有一定價(jià)值。現(xiàn)在主流的化療方案是化療藥(如紫杉醇、吉西他濱等)聯(lián)合鉑類的兩藥方案,但仍不能明顯提高患者的生存率。對(duì)于目前化療藥物中最新且副作用最少的培美曲塞/順鉑與吉西他濱/順鉑療效的研究顯示,治療有效率在28.2%

3、～30.6%,患者1年生存率為41.9%～43.5%。對(duì)于初始化療已經(jīng)6個(gè)周期的患者,可加用放療以及手術(shù)前、后輔助放療。這對(duì)早期肺癌患者,無(wú)明顯益處,單純放療患者的生存率更低。因此,研究新的有效的化療藥物,可以延長(zhǎng)晚期肺癌患者壽命,并為新藥的上市提供理論依據(jù)。
　　 目的:
　　 本實(shí)驗(yàn)擬探索全反式維甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)、順鉑(cisplatin,DDP)聯(lián)合作用,誘導(dǎo)肺癌A5

4、49凋亡,并觀察ATRA抑制肺癌A549細(xì)胞增殖的最適濃度。研究上述藥物作用后的肺癌A549細(xì)胞與程序化死亡因子基因5(Programmed Cell Death5,PDCD5)、TP53基因表達(dá)的關(guān)系,為肺癌新的治療方法提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.以不同濃度的ATRA(10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L)與順鉑(10-2μmol/L)聯(lián)合作用于肺癌A549細(xì)胞,采用四甲基偶氮唑法(M

5、osmann TetrozoliumTest,MTT)法間接檢測(cè)作用于腫瘤細(xì)胞后24h、48h、72h后,檢測(cè)細(xì)胞吸光度值。評(píng)價(jià)ATRA、DDP對(duì)于肺癌A549細(xì)胞的抑制作用。
　　 2.利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)法(reverse transeriotion-polymerase chainreaction,RT-PCR)檢測(cè)ATRA、DDP作用于肺癌細(xì)胞A549細(xì)胞后,凋亡相關(guān)基因PDCD5、TP53信使核糖核酸(messen

6、ger RNA,mRNA)的表達(dá)。
　　 3.所有數(shù)據(jù)均采用SPSS12.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析,實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以-x±s表示,多組間數(shù)值變量的比較用方差分析。兩組定量配對(duì)數(shù)據(jù)的差別選用配對(duì)t檢驗(yàn),不符合正態(tài)性的定量資料采用配對(duì)資料的符號(hào)秩和檢驗(yàn)。兩變量數(shù)據(jù)符合正態(tài)性分布的線性相關(guān)性研究,用pearson檢驗(yàn),否則應(yīng)用spearman檢驗(yàn),并對(duì)相關(guān)系數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05.
　　 結(jié)果:
　　 1.

7、MTT實(shí)驗(yàn)可觀察到,24h、48h、72h時(shí),ATRA組、順鉑組及兩藥聯(lián)合組,與陰性對(duì)照組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);藥物作用24h后,在ATRA不同的濃度間,抑制率隨濃度的增加而增加(P＜0.05),在二藥聯(lián)合組,也可觀察到同樣結(jié)果(P＜0.05);藥物作用48h后,在ATRA不同的濃度間,抑制率隨濃度的增加而增加(P＜0.05),在二藥聯(lián)合組中,不同濃度間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(P＞0.05);藥物作用72h后,在ATRA不

8、同的濃度問(wèn),抑制率隨濃度的增加而增加(P＜0.05)。在二藥聯(lián)合組,不同濃度間差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　 2.計(jì)算PDCD5及TP53在各個(gè)藥物濃度組中的mRNA的相對(duì)含量,PDCD5與TP53的相對(duì)含量中,每組數(shù)值與組1對(duì)比,P＜0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。a組與b組比較,t=2.749,P=0.011＜0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。繪制不同ATRA、DDP作用于肺癌A549細(xì)胞后,PDCD5及TP53mRNA的

9、相對(duì)含量的數(shù)據(jù)分布圖,計(jì)算兩者Spearman相關(guān)系數(shù),rs=0.255,對(duì)相關(guān)系數(shù)進(jìn)行顯著性檢驗(yàn),P＜0.05,檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。
　　 結(jié)論:
　　 ATRA對(duì)肺癌A549的生長(zhǎng)具有抑制作用,有明顯的濃度和時(shí)間依賴性,并發(fā)現(xiàn)ATRA的較適宜的抑癌濃度為10-5mol/L,與DDP聯(lián)合應(yīng)用可增加肺癌A549細(xì)胞的抑制率,降低單用ATRA的劑量,從而減少將來(lái)臨床應(yīng)用中可能引發(fā)的毒副作用。
　　 ATRA和/或