全反式維甲酸對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2的分化、侵襲遷移的影響.pdf

1、目的：
　　全反式維甲酸（ATRA）是分化誘導(dǎo)劑中最重要的一種,已成功應(yīng)用于誘導(dǎo)白血病細(xì)胞的分化，目前的一些實(shí)驗(yàn)表明,它在一些實(shí)體腫瘤中也有作用。Nanog作為腫瘤干細(xì)胞分化的指標(biāo)，不僅與生殖系統(tǒng)腫瘤關(guān)系密切，在胃腸道及肝癌中也存在表達(dá)，且與實(shí)體瘤分化狀態(tài)密切相關(guān)。本研究旨在探討ATRA對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2的分化、侵襲遷移的影響及對(duì)腫瘤干細(xì)胞分化基因Nanog的影響，以闡明ATRA的抗腫瘤作用及初步探討其抗腫瘤作用的機(jī)制。

2、　　方法：
　　MTT法測(cè)定ATRA對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2增殖的抑制作用；平皿集落形成法檢測(cè)ATRA對(duì)HepG2細(xì)胞錨定依賴性生長能力的影響；ELISA法檢測(cè)ATRA作用前后HepG2 AFP分泌量的變化；RT-PCR檢測(cè)ATRA對(duì)HepG2細(xì)胞Nanog及MMP9的mRNA表達(dá)的影響；Western-blot檢測(cè)ATRA對(duì)HepG2細(xì)胞Nanog及MMP9蛋白表達(dá)的影響，侵襲小室及劃痕實(shí)驗(yàn)檢測(cè)ATRA對(duì)侵襲及遷移能力的影響。

3、>　　結(jié)果：
　　1. ATRA抑制肝癌細(xì)胞HepG2的增殖及錨定依賴性生長能力
　　MTT法顯示ATRA抑制體外培養(yǎng)人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞的生長，呈劑量和時(shí)間依賴性。平皿克隆形成實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明未經(jīng)ATRA處理的HepG2可長成克隆，但經(jīng)ATRA刺激后，其形成的克隆變小且數(shù)目明顯減少。
　　2. ATRA誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞的分化
　　ELISA顯示ATRA誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞分化，使代表肝細(xì)胞惡變的AFP分泌量明顯

4、下降。
　　3. ATRA抑制HepG2細(xì)胞MMP9的表達(dá)
　　RT-PCR和Western-blot結(jié)果均顯示ATRA在24小時(shí)呈濃度依賴性下調(diào)MMP9 mRNA及蛋白表達(dá)。
　　4. ATRA抑制HepG2細(xì)胞的侵襲遷移能力
　　Transwell實(shí)驗(yàn)和劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示ATRA在24小時(shí)呈濃度依賴性降低HepG2細(xì)胞的侵襲和遷移能力。
　　5. ATRA抑制HepG2細(xì)胞Nanog的表達(dá)
　　RT