2，5-己二酮對(duì)大鼠神經(jīng)電生理和神經(jīng)組織及血清中氧化—抗氧化系統(tǒng)的影響.pdf

1、目的2,5-己二酮(HD)是工業(yè)有機(jī)溶劑正己烷在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物，介導(dǎo)了正己烷誘導(dǎo)的神經(jīng)退行性病變。本研究通過建立大鼠HD亞慢性中毒模型，測(cè)定染毒后大鼠坐骨神經(jīng)電生理指標(biāo)，中樞和周圍神經(jīng)組織及血清中氧化抗氧化指標(biāo)的時(shí)序性變化，以探討脂質(zhì)過氧化在HD引起的神經(jīng)退行性病變中的作用，為進(jìn)一步研究HD誘導(dǎo)的中毒性周圍神經(jīng)病的發(fā)病機(jī)制提供依據(jù)。 方法： 1．建立動(dòng)物模型健康wistar雄性成年大鼠100只，隨機(jī)分為0周對(duì)

2、照組和2、4、6、8周染毒組，每組20只。HD溶于生理鹽水中，以400mg/Kg．bw劑量，腹腔注射，每周4次，連續(xù)8周。 2．體重和神經(jīng)行為指標(biāo)測(cè)定密切觀察各組大鼠的一般狀況變化，每周測(cè)量大鼠體重，記錄其行為、步態(tài)表現(xiàn)，并轉(zhuǎn)化為量化評(píng)分。 3．坐骨神經(jīng)電生理指標(biāo)的測(cè)定采用生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)分別在以上5個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定并分析了大鼠在體及離體坐骨一腓神經(jīng)干復(fù)合動(dòng)作電位波幅、時(shí)程、潛伏期、神經(jīng)傳導(dǎo)速度、閾強(qiáng)度、最大

3、刺激強(qiáng)度六項(xiàng)電生理參數(shù)。 4．神經(jīng)組織和血清中氧化．抗氧化系統(tǒng)相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)采用可見/紫外分光光度法分別在以上5個(gè)時(shí)間點(diǎn)測(cè)定大腦、脊髓、坐骨神經(jīng)等神經(jīng)組織和血清中谷胱甘肽(G1utathione，GSH)、丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量、抗活性氧(reactive oxygen species，ROS)活性和超氧化物歧化酶(Supe：FOXidedismutase，SOD)、谷胱甘肽過氧化物酶(G1u

4、tathione peroxidase，GSH-Px)、谷胱甘肽還原酶(G1utathione reductase，GR)活力的變化。 5．神經(jīng)組織中細(xì)胞色素C(Cytochrome，Cyt C)表達(dá)的檢測(cè)采用免疫組織化學(xué)方法分別檢測(cè)了大腦、小腦和脊髓中Cyt C表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1．體重及步態(tài)變化 與對(duì)照組相比，HD染毒后大鼠體重隨染毒時(shí)間呈現(xiàn)進(jìn)行性下降。神經(jīng)行為學(xué)指標(biāo)測(cè)定結(jié)果表明，HD染毒對(duì)大鼠

5、神經(jīng)行為和功能的損害，尤其是后肢運(yùn)動(dòng)功能的損傷，隨染毒時(shí)間的增加而逐步進(jìn)展，HD染毒組大鼠步態(tài)評(píng)分隨染毒時(shí)間的延長(zhǎng)逐步增加。 2．坐骨神經(jīng)電生理指標(biāo) (1)在體試驗(yàn)中，自染毒第4周起，各電生理指標(biāo)均有顯著性改變。復(fù)合動(dòng)作電位波幅進(jìn)行性下降，第4、6、8周與O周對(duì)照組相比分別降低24.5％(P<0.05)，45.8％(P<0.01)，59.8％(P<0.01)；神經(jīng)傳導(dǎo)速度明顯減慢(P<0.01)，與0周對(duì)

6、照組相比分別降低43.8％、73.7％、72.9％；復(fù)合動(dòng)作電位潛伏期逐漸延長(zhǎng)(P<0.01)，與0周對(duì)照組相比分別增加48.0％，113.1％，117.8％，閾強(qiáng)度進(jìn)行性升高(P<0.01)，與0周對(duì)照組相比分別增加50.0％，51.6％，93.8％。最大刺激強(qiáng)度進(jìn)行性升高(P<0.01)，與0周對(duì)照組相比分別增加62.5％，81.3％，131.3％。 (2)離體試驗(yàn)中，HD染毒大鼠復(fù)合動(dòng)作電位波幅隨染毒時(shí)間的增加呈降低趨勢(shì)(

7、P<0.01)，第4、6、8周與0周對(duì)照組相比分別降低37.7％，66.0％，77.9％;復(fù)合動(dòng)作電位時(shí)程呈延長(zhǎng)趨勢(shì)，第4、6、8周與0周對(duì)照組相比分別增加24.2％(P<0.01)，46.9％(P<0.01)，51.0％(P<0.01)；復(fù)合動(dòng)作電位潛伏期呈延長(zhǎng)趨勢(shì)，第6周和第8周與0周對(duì)照組相比分別增加33.6％(P<0.01)，32.3％(P<0.01)；神經(jīng)傳導(dǎo)速度逐步減慢，第4周至第8周與0周對(duì)照組相比分別降低17.1％(P<

8、0.05)、22.2％(P<0.01)、24.7％(P<0.01)；閾強(qiáng)度呈增加趨勢(shì)，僅第8周與對(duì)照組相比均有顯著性差異(P<0.01)，與0周對(duì)照組相比增加55.9％；最大刺激強(qiáng)度與0周對(duì)照組相比無顯著性差異(P>0.05)。 3．神經(jīng)組織及血清中氧化．抗氧化指標(biāo)的測(cè)定結(jié)果 (1)大腦HD染毒后大鼠大腦中MDA的含量隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)呈明顯增加的趨勢(shì)，第2、4、6、8周分別增加了18.3％，57.7％，53.8％和5

9、5.8％，與對(duì)照組相比均存在顯著性差異(P<0.05)；GSH的含量無明顯改變(P>0.05)；染毒后大鼠大腦中抗ROS活力明顯增加，在染毒的第4、6、8周分別增加了21.6％，13.0％和18.0％，與對(duì)照組相比均存在顯著性差異(P<0.05)；SOD活力改變與對(duì)照組相比無顯著性差異(P>0.05)； GSH-PX活力呈隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)而明顯增加的趨勢(shì)，染毒第8周增加了29.4％，與對(duì)照組相比存在顯著性差異(P<0.01)；GR活力呈

10、隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)而明顯增加的趨勢(shì)，在染毒第6、8周分別增加了24.0％(P<0.05)和32.1％(P<0.01)，與對(duì)照組相比存在顯著性差異。 (2)脊髓HD染毒后大鼠脊髓中MDA的含量隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)呈增加的趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比不存在顯著性差異(P>0.05)；GSH的含量無明顯改變(P>0.05)；抗ROS活力有增加的趨勢(shì)，但與對(duì)照組相比無顯著性差異(P>0.05)；SOD活力有增加的趨勢(shì)，與對(duì)照組相比存在明顯差異(P<0.0

11、5)，在染毒的第4、6、8周分別增加了32.8％，21.7％和13.8％； GSH-PX活力有增加的趨勢(shì)，在染毒的第4、6、8周分別增加了37.9％(P<0.01)，27.1％(P<0.05)和50.0％(P<0.01)，與0周對(duì)照組相比有顯著性差異。 (3)坐骨神經(jīng)HD染毒后大鼠坐骨神經(jīng)中MDA的含量隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)呈明顯增加的趨勢(shì)(P<0.05)，在染毒的第6、8周分別增加了27.1％和29.2％，；GSH的含量隨染毒時(shí)間的

12、延長(zhǎng)明顯減少，在染毒的第4、6、8周分別降低了9.5％，6.0％和8.8％，與對(duì)照組相比均存在顯著性差異(P<0.05)；抗ROS活力有增加的趨勢(shì)，其中染毒8周增加了16.4％(P<0.05)，與0周對(duì)照組相比有顯著性差異； SOD活力改變與對(duì)照組相比無顯著性差異(P>0.05)； GSH-PX活力呈隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)而明顯增加的趨勢(shì)，在染毒的第2、4、6、8周分別增加了7.3％，43.2％，68.9％和81.1％，與對(duì)照組相比均存在顯

13、著性差異(P<0.05)；GR活力隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)呈明顯增加的趨勢(shì)，在染毒的第4、6、8周分別增加了49.6％，47.3％和61.1％，與對(duì)照組相比存在顯著性差異(P<0.05)。 (4)血清HD染毒后大鼠血清中MDA的含量隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)呈明顯增加的趨勢(shì)，在染毒第6、8周分別增加了23.9％(P<0.05)和38.1％(P<0.01)，與0周對(duì)照組相比有顯著性差異；GSH的含量無明顯改變(P>0.05)；抗ROS活力與對(duì)照組相比無

14、顯著性差異(P>0.05)；SOD活力改變與對(duì)照組相比無顯著性差異(P>0.05)；GSH-PX活力隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)而明顯增加，染毒第2、4、6、8周分別增加了26.8％，41.6％，48.9％和59.2％，與對(duì)照組相比均存在顯著性差異(P<0.01)； GR活力均隨染毒時(shí)間延長(zhǎng)呈明顯增加的趨勢(shì)，染毒第6、8周分別增加了117.9％和150.0％，與對(duì)照組相比存在顯著性差異(P<0.01)。 4．中樞神經(jīng)系統(tǒng)中CytC表達(dá)的檢測(cè)

15、HD染毒后大腦組織中CytC的表達(dá)有降低的趨勢(shì)，但與0周對(duì)照組相比均無顯著性差異。小腦和脊髓中CytC的表達(dá)無明顯改變。 結(jié)論： 1．HD染毒顯著降低大鼠坐骨神經(jīng)傳導(dǎo)功能，并且隨染毒時(shí)間的增加逐步加重。 2．HD染毒可引起大鼠神經(jīng)組織及血清脂質(zhì)過氧化水平升高，同時(shí)抗氧化酶(如GSH-Px，GR)活性升高，隨染毒時(shí)間的增加而逐步加重。 3．染毒大鼠神經(jīng)行為、周圍神經(jīng)電生理參數(shù)及氧化．抗氧化指標(biāo)