2,5-己二酮誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)組織細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:觀察正己烷的終毒物2，5-己二酮(HD)暴露大鼠神經(jīng)組織細(xì)胞凋亡發(fā)生頻率，探討神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)介導(dǎo)PI3K/AKT信號(hào)通路在HD誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)組織細(xì)胞凋亡的作用。
　　材料和方法:40只雄性SD大鼠購(gòu)于大連醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心，稱重并按隨機(jī)數(shù)表法分為4組。將HD溶于0.9％無菌生理鹽水，用腹腔注射方法對(duì)大鼠進(jìn)行染毒。試驗(yàn)組的染毒劑量分別為100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg，注射量為0.3ml/10

2、0 g;對(duì)照組以相同劑量生理鹽水腹腔注射。染毒時(shí)間為5周，每周5次。試驗(yàn)期間，每周末對(duì)各組大鼠步態(tài)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)價(jià);用肌電圖與誘發(fā)電位儀檢測(cè)各組大鼠尾神經(jīng)遠(yuǎn)端潛伏期(DL)和神經(jīng)傳導(dǎo)速度(MCV)。TUN EL-Hoe chst雙染色法，觀察各組大鼠脊髓神經(jīng)細(xì)胞凋亡發(fā)生頻率;用Western-Blotting免疫印跡技術(shù)，檢測(cè)各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織NGF、Akt、p-Akt(ser-473)、Bad和p-Bad(ser-136)蛋

3、白的相對(duì)表達(dá)水平;用Real-time RT-PCR技術(shù)，檢測(cè)各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織NGF基因相對(duì)表達(dá)水平。試驗(yàn)結(jié)果用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:對(duì)照組大鼠體重在試驗(yàn)過程中逐漸增長(zhǎng)，第5周觀察結(jié)束時(shí)，平均體重最初平均體重增加了23.96％(P＜0.05)，100 mg/kg HD染毒組大鼠體重與對(duì)照組之間無顯著性差異(P＞0.05)，200 mg/kg HD染毒組大鼠體重約為對(duì)照組的75.59％(P＜0.

4、05），400 mg/kg HD染毒組大鼠體重從染毒第1周開始就處于負(fù)增長(zhǎng)狀態(tài)，至試驗(yàn)結(jié)束時(shí)動(dòng)物嚴(yán)重消瘦，平均體重僅為對(duì)照組的39.70％(P＜0.05)。染毒第5周，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg HD染毒組大鼠的步態(tài)評(píng)分值分別為1.80，2.80和3.94，顯著高于對(duì)照組(P＜0.01）。染毒第5周，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg HD染毒組大鼠尾神經(jīng)傳導(dǎo)潛伏期比同時(shí)期對(duì)照組分

5、別提高了5.67％、30.67％和75.51％，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);200 mg/kg和400 mg/kg HD染毒組大鼠尾神經(jīng)傳導(dǎo)速度與同期對(duì)照組相比分別降低30.30％(P＜0.01)和44.45％(P＜0.01）。TUNEL-Hoechst雙染色結(jié)果顯示，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kgHD染毒組的凋亡指數(shù)（AI）分別為5.34％、12.45％和21.56％，與對(duì)照組相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

6、義(P＜0.05)。Real-time RT-PCR檢測(cè)結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，100 mg/kg、200 mg/kg和400 mg/kg HD暴露組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織的NGFmRNA表達(dá)量顯著降低(P＜0.05），而且呈現(xiàn)劑量-反應(yīng)關(guān)系。Western-Blotting檢測(cè)結(jié)果顯示，HD暴露各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織中NGF蛋白表達(dá)水平明顯低于對(duì)照組(P＜0.05），且呈劑量依賴性降低;HD暴露各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織中Akt和

7、Bad蛋白表達(dá)量與對(duì)照組比較，均無顯著性差異(P＞0.05），而HD暴露各組大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織中p-Akt(ser-473)和p-Bad(ser-136)的蛋白表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P＜0.05），且呈現(xiàn)劑量-反應(yīng)關(guān)系。
　　結(jié)論:HD暴露可誘導(dǎo)大鼠神經(jīng)組織細(xì)胞凋亡;顯著下調(diào)大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織NGF基因和蛋白表達(dá);顯著下調(diào)大鼠脊髓和坐骨神經(jīng)組織p-Akt和p-Bad蛋白表達(dá)。結(jié)果提示，抑制NGF介導(dǎo)的PI3K/AKT信號(hào)轉(zhuǎn)