核因子κB在阿霉素誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡中作用的實驗研究.pdf

1、該實驗旨在探索肝癌組織中核因子κB及其下游抗凋亡基因Bc1-2的表達(dá)與肝癌發(fā)生、發(fā)展的聯(lián)系,以及兩者之間的相互關(guān)系.觀察肝癌細(xì)胞中核因子κB在化療藥物阿霉素作用下在細(xì)胞核和細(xì)胞漿內(nèi)的變化,研究其在阿霉素誘導(dǎo)凋亡過程中的作用及核因子κB特異性抑制劑的對抗作用,探尋肝癌細(xì)胞對化療藥物誘導(dǎo)凋亡發(fā)生抵抗的機理以及使用相應(yīng)的抑制方法進(jìn)行抑制,從而為有效提高化療藥物的治療效率提供一定的實驗基礎(chǔ).目的:探索核因子κB(NF-κB)在肝癌的表達(dá)變化,以

2、及與病理分期和其下游抗凋亡基因Bcl-2表達(dá)的相關(guān)性.人肝癌細(xì)胞(SMMC-7721)中核因子κB在化療藥物阿霉素誘導(dǎo)前和誘導(dǎo)后在細(xì)胞漿和細(xì)胞核中的表達(dá)變化,以及使用核因子κB特異性抑制劑PDTC對核因子κB的激活進(jìn)行抑制,觀察這一過程中SMMC-7721肝癌細(xì)胞的凋亡變化.方法:采用免疫組織化學(xué)方法,檢測NF-κB在40例肝細(xì)胞肝癌及15例正常肝組織中的表達(dá)變化及抗凋亡基因Bcl-2的相應(yīng)表達(dá).應(yīng)用免疫組化SABC法觀察核因子κB被阿

3、霉素激活時在細(xì)胞漿和細(xì)胞核的表達(dá)變化.提取SMMC-7721肝癌細(xì)胞核蛋白,ELISA法檢測阿霉素作用下和阿霉素、PDTC共同作用下不同時間細(xì)胞核中核因子κB的變化.MTT實驗和Tunel法分別檢測兩種情況下SMMC-7721細(xì)胞的死亡率和凋亡指數(shù)(AI)變化.結(jié)論:NF-κB異常表達(dá)可能與肝癌的發(fā)生、發(fā)展有關(guān),并在一定程度上可以解釋肝癌對化療的抵抗作用.NF-κB與Bcl-2高度相關(guān),表明NF-κB可以通過對下游抗凋亡基因表達(dá)的調(diào)控,

4、參與了肝癌的抗凋亡過程.SMMC-7721細(xì)胞中的核因子κB可以被阿霉素類DNA損傷藥物激活,由胞漿轉(zhuǎn)移至細(xì)胞核,發(fā)揮其基因調(diào)控作用,對凋亡過程進(jìn)行抑制,核因子κB特異性抑制劑PDTC可以有效抑制這一過程.核因子κB的激活被PDTC特異性抑制后比未加抑制劑時,細(xì)胞凋亡數(shù)量顯著增加,IC50值降低,證實核因子κB的激活可以有效抑制SMMC-7721細(xì)胞凋亡.這一結(jié)果預(yù)示采用高特異性核因子κB抑制劑,結(jié)合使用化療藥物,可以有效提高腫瘤患者的