2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、第一部分
   目的:研究組織因子(TF)對化療藥物誘導(dǎo)人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的影響及其機制。
   方法:以Western Blotting檢測TF表達,以WST法檢測阿霉素的細(xì)胞毒性。以 Western Blotting檢測阿霉素誘導(dǎo)的Caspase-3、PARP的裂解。
   結(jié)果:人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U373MG高表達TF而 LN-229細(xì)胞系中TF表達水平低;阿霉素的細(xì)胞毒性在U373MG中較弱而在LN

2、-229中較強。 以TF-pcDNA3真核表達載體轉(zhuǎn)染低表達TF的LN-229細(xì)胞,TF表達水平呈劑量依賴性增強。轉(zhuǎn)染TF的LN-229細(xì)胞及轉(zhuǎn)染空載體pcDNA3的對照細(xì)胞分別以阿霉素處理16h、24h、48h,可見轉(zhuǎn)染細(xì)胞較對照細(xì)胞Caspase-3、PARP的裂解延遲出現(xiàn)。以不同濃度阿霉素處理48h后,可見轉(zhuǎn)染TF的LN-229細(xì)胞的存活數(shù)較對照細(xì)胞明顯增多。Akt在U373MG中呈強活化,而LN-229中活化水平低。以FVII與

3、轉(zhuǎn)染TF的LN-229細(xì)胞作用,可觀察到Akt的顯著激活,呈時間依賴性。
   結(jié)論:人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中TF的異常高表達可抑制阿霉素誘導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞凋亡,此效應(yīng)可能與TF與FVII相互作用后對下游PI3K/Akt信號的激活有關(guān)。TF介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)對阿霉素誘導(dǎo)凋亡的抑制作用可能影響腫瘤細(xì)胞對化療藥物的耐受性和疾病進展。
   第二部分
   目的:構(gòu)建組織因子(TF)特異性干擾RNA表達載體,抑制人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞TF

4、表達。
   方法:分子生物學(xué)方法構(gòu)建TFsiRNA-pSUPER表達載體,限制酶切予以初步篩選,基因測序進行證實。以脂質(zhì)體Lipofectamine2000介導(dǎo)轉(zhuǎn)染人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U373MG。以Western Blotting檢測TF表達。
   結(jié)果:所構(gòu)建TFsiRNA-pSUPER表達載體經(jīng)基因測序證實。U373MG細(xì)胞高表達TF,TFsiRNA-pSUPER表達載體轉(zhuǎn)染48h后,TF表達水平與轉(zhuǎn)染pSUP

5、ER質(zhì)粒的對照細(xì)胞相比顯著降低,呈劑量依賴性。
   結(jié)論:人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤U373MG 中TF異常高表達,本研究構(gòu)建的TFsiRNA表達載體可在U373MG 中特異性下調(diào)TF表達,可作為干預(yù)TF表達、研究其非凝血功能的有效手段。
   第三部分
   目的:研究組織因子(TF)表達下調(diào)對阿霉素誘導(dǎo)人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞凋亡的影響。
   方法:以Western印跡法檢測TF表達。分子生物學(xué)方法構(gòu)建TFsiRN

6、A-pSUPER表達載體,以脂質(zhì)體介導(dǎo)進行基因轉(zhuǎn)染。以WST法檢測阿霉素細(xì)胞毒性。以 Western印跡法檢測阿霉素誘導(dǎo)的Caspase-3、PARP的裂解。以Hochest33342染色,熒光顯微鏡下檢測凋亡細(xì)胞。
   結(jié)果:①人膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U373MG 高表達TF;②構(gòu)建TFsiRNA-pSUPER表達載體,以之轉(zhuǎn)染高表達TF的U373MG 細(xì)胞,TF表達水平呈劑量依賴性降低;③轉(zhuǎn)染TFsiRNA-pSUPER的U3

7、73MG 細(xì)胞及轉(zhuǎn)染pSUPER質(zhì)粒的對照細(xì)胞分別以不同濃度阿霉素處理48h,前者與后者相比存活細(xì)胞數(shù)顯著降低;④轉(zhuǎn)染TFsiRNA-pSUPER的U373MG 細(xì)胞及轉(zhuǎn)染pSUPER質(zhì)粒的對照細(xì)胞分別以阿霉素處理4h、8h,可見前者較后者Caspase-3、PARP裂解增強;⑤以Hochest33342染色檢測到轉(zhuǎn)染TFsiRNA-pSUPER的U373MG 細(xì)胞與對照細(xì)胞相比,經(jīng)阿霉素處理后的凋亡細(xì)胞數(shù)顯著增多(P<0.05)。

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