核因子-κB在苦參堿誘導(dǎo)的肝癌細(xì)胞凋亡中的作用.pdf

1、目的：研究苦參堿(matrine，Mat)對人肝癌細(xì)胞HepG2核因子-κB(nuclear factor-kappaB，NF-κB)表達(dá)的影響以及二硫代氨基甲酸吡咯烷(pyrrolidine dithiocarbamate，PDTC)抑制核因子-κB活化對苦參堿誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡的影響。 方法：MTT法觀察Mat組(0.8、1.0、 1.5、2.0、2.5 g/L)及聯(lián)合組(PDTC+Mat組)對細(xì)胞增殖的抑制作用；1

2、.5g/L Mat作用HepG2細(xì)胞3h、6h、12h、24h后，采用免疫細(xì)胞化學(xué)法觀察細(xì)胞中NF-κB的活化與分布，電泳遷移率變動(dòng)分析(electrophoretic mobility shift assay,EMSA)檢測細(xì)胞核內(nèi)NF-κB蛋白含量。將HepG2細(xì)胞接種于培養(yǎng)瓶，隨機(jī)分為對照組、PDTC組(20μmol/L)、Mat組(1.5g/L)和聯(lián)合組：PDTC(20μmol/L)+Mat(1.5g/L)組，作用3小時(shí)后，分別

3、采用免疫細(xì)胞化學(xué)法和電泳遷移率變動(dòng)分析(EMSA)觀察和檢測細(xì)胞核內(nèi)NF-κB蛋白表達(dá)水平；作用12小時(shí)后，用流式細(xì)胞儀和末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的脫氧三磷酸尿苷缺口末端標(biāo)記(terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated dUTP nick end labeling，TUNEL)檢測 HepG2細(xì)胞凋亡。 結(jié)果： 1.一定濃度的Mat可抑制HepG2細(xì)胞增殖并且抑制作用呈時(shí)

4、間和劑量依賴性；PDTC增強(qiáng)了Mat對細(xì)胞增殖的抑制作用。 2.Mat作用不同時(shí)間能夠不同程度地使細(xì)胞核中NF-κB免疫組化染色增強(qiáng)。對照組NF-κB在HepG2細(xì)胞胞漿中表達(dá)，Mat刺激后轉(zhuǎn)入核內(nèi)，胞核胞漿均陽性表達(dá)。PDTC作用后.再用Mat刺激，HepG2細(xì)胞核及細(xì)胞漿內(nèi)NF-κB的表達(dá)減弱。 3.EMSA檢測結(jié)果顯示：Mat作用不同時(shí)間能不同程度的誘導(dǎo)細(xì)胞核內(nèi)NF-κB的表達(dá)，各組的蛋白表達(dá)水平均高于對照組(P＜

5、0.01)，且苦參堿作用6h誘導(dǎo)NF-κB活化達(dá)高峰。PDTC組NF-κB蛋白表達(dá)水平低于對照組(P＜0.01)，聯(lián)合組核內(nèi)NF-κB表達(dá)高于對照組(P＜0.01)，但明顯低于Mat組(P＜0.01)。 4.各組凋亡率分別為：對照組(2.41±0.74)％，PDTC組(3.07±0.46)％，Mat組為(6.11±0.81)％，PDTC+Mat組為(12.95±2.26)％。 結(jié)論：苦參堿可誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞凋亡，亦可誘