糖皮質(zhì)激素對肺炎支原體感染大鼠模型的作用研究.pdf

1、目的:
　　 肺炎支原體是社區(qū)獲得性肺炎的重要病原體之一,但目前尚不清楚其致病機(jī)制。近年來支原體肺炎的發(fā)病率呈上升趨勢,且易于引起多種肺外并發(fā)癥。目前臨床上治療支原體肺炎的首選藥物為大環(huán)內(nèi)酯類抗生素,但該藥對于難治性及重癥支原體肺炎無效。臨床實踐證實,對于這些患者推薦在抗感染治療的基礎(chǔ)上加用激素治療。本實驗旨在建立肺炎支原體感染的大鼠動物模型,在動物體內(nèi)模擬肺炎支原體感染致人類肺炎的情況,考察糖皮質(zhì)激素對肺炎支原體感染的治療效果

2、。通過本實驗,可為研究肺炎支原體的致病機(jī)制及肺炎支原體肺炎的治療策略提供合適的動物模型,為臨床應(yīng)用激素治療肺炎支原體肺炎提供實驗依據(jù)。
　　 方法:
　　 (1)肺炎支原體感染大鼠模型的建立。采用固體培養(yǎng)計數(shù)法計算肺炎支原體純培養(yǎng)物的濃度。將30只Sprague-Dawley健康雄性大鼠隨機(jī)分為肺炎支原體感染模型組及培養(yǎng)基基質(zhì)對照組。連續(xù)4日對感染組和對照組大鼠分別接種100μL濃度為106CFU/ml的肺炎支原體液體純

3、培養(yǎng)物或100μL肺炎支原體培養(yǎng)基。接種后1、3、5、8、10日時,分批處死感染組和對照組大鼠,采集肺泡灌洗液和肺組織。采用熒光定量PCR方法測定大鼠肺泡灌洗液中肺炎支原體含量并對大鼠肺組織標(biāo)本進(jìn)行免疫組化染色后進(jìn)行評分。以大鼠感染肺炎支原體的濃度及肺組織病例評分確定肺炎支原體感染大鼠模型是否建立成功。(2)激素對肺炎支原體感染大鼠的療效觀察。采用方法1中的方法,建立肺炎支原體感染大鼠模型。95只感染肺炎支原體的Sprague-Dawl

4、ey大鼠在造膜成功后,被隨機(jī)被分入阿奇霉素組(25只)、地塞米松組(25只)、聯(lián)合用藥組(25只)及安慰劑組(20只)接受相應(yīng)藥物治療。其中,阿奇霉素組每天皮下注射(10mg/kg體重),地塞米松組每天腹腔注射地塞米松磷酸鈉注射液(0.5mg/kg體重),聯(lián)合應(yīng)用藥組按上述用量聯(lián)合使用兩種藥物,安慰劑組注射生理鹽水。用藥1、3、5、8、10天后分批處死大鼠,采集肺泡灌洗液及完整肺組織,進(jìn)行熒光定量PCR檢測和肺組織病理評分,觀察激素對肺

5、炎支原體感染大鼠的療效。
　　 結(jié)果:
　　 (1)感染組:造模1天后,大多數(shù)實驗動物出現(xiàn)明顯的倦怠,部分大鼠出現(xiàn)豎毛,至第5天逐漸恢復(fù),3天后部分大鼠出現(xiàn)輕微的咳嗽,體重增長減慢,實驗中1只大鼠出現(xiàn)轉(zhuǎn)圈現(xiàn)象,大鼠肺組織多見充血,有3只大鼠肺泡灌洗液呈混濁的紅色,推測可能發(fā)生了出血；肺組織病例評分方面造模后1天感染組大鼠就出現(xiàn)炎癥炎癥,到第3天炎癥達(dá)到最重,病理評分最高分為16分,第8、10天病理評分分別為8.1、7.1

6、分,天間病理評分除第8天和第10天之間結(jié)果無統(tǒng)計學(xué)差異,其他各天間相比均有統(tǒng)計學(xué)差異；肺泡灌洗液熒光定量PCR結(jié)果顯示DNA量(對數(shù))天間相互比較并無統(tǒng)計學(xué)差異。對照組:動物無異常表現(xiàn),肺組織病理評分無明顯炎癥改變,熒光定量PCR檢測未發(fā)現(xiàn)肺炎支原體。(2)激素對肺炎支原體感染大鼠的療效觀察。通過對不同用藥的大鼠進(jìn)行病理評分發(fā)現(xiàn),聯(lián)合用藥組從第3天開始肺組織病理評分明顯低于其它3組(p<0.05)；單用阿奇霉素組和單用地塞米松組的病理評

7、分分別從第3天、第5天開始明顯低于安慰劑組(p<0.05)；在第3天,地塞米松組肺組織評分明顯高于阿奇霉素組和聯(lián)合用藥組(p<0.05),在第5、8、10天阿奇霉素組與地塞米松組相比肺組織評分無差異(p>0.05)。肺炎支原體定量測定結(jié)果表明,聯(lián)合組在第5、8、10天時大鼠肺泡灌洗液肺炎支原體DNA量降低；阿奇霉素組在第3天降低肺泡灌洗液MPDNA量后,在第5、8、10天的肺泡灌洗液肺炎支原體DNA量都與安慰劑組沒有統(tǒng)計學(xué)上的差異；地塞

8、米松組并不能降低肺泡灌洗液中肺炎支原體DNA含量。
　　 結(jié)論:
　　 (1)本研究成功建立了具有明顯肺部炎癥改變的肺炎支原體感染大鼠模型。該模型可為研究肺炎支原體致病機(jī)制及體內(nèi)藥物對肺炎支原體的敏感性提供合適的動物模型(2)地塞米松并不減少大鼠肺泡灌洗液中肺炎支原體的數(shù)量,這說明地塞米松對肺炎支原體沒有直接的殺傷作用。但是,比較不同處理組的病理評分發(fā)現(xiàn),聯(lián)合地塞米松治療的聯(lián)合用藥組,其治療效果優(yōu)于單獨抗生素治療組,這說

9、明地塞米松可能通過發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)的作用而減輕肺組織炎癥。同時,本研究亦發(fā)現(xiàn),單獨接受地塞米松治療組效果不佳,這可能是由于地塞米松起效緩慢且無抗菌作用相關(guān)。通過本研究表明,對于重癥肺炎支原體感染性肺炎或難治性肺炎,應(yīng)在治療過程中加用激素類藥物,緩解機(jī)體過度的免疫應(yīng)答,加速疾病的恢復(fù)。
　　 (3)在藥物試驗中,接受阿奇霉素用藥組大鼠似乎出現(xiàn)了肺炎支原體對阿奇霉素耐藥的情況,但是阿奇霉素組的肺組織評分仍存在降低趨勢,這提示我們要正確的