新的甾體類藥物NSC67657誘導(dǎo)HL60細胞分化時關(guān)鍵蛋白的篩選、鑒定及其功能研究.pdf

1、重慶醫(yī)科大學博士學位論文新的甾體類藥物NSC67657誘導(dǎo)HL60細胞分化時關(guān)鍵蛋白的篩選、鑒定及其功能研究姓名：王偉佳申請學位級別：博士專業(yè)：臨床檢驗診斷學指導(dǎo)教師：邱宗蔭20090501重慶醫(yī)科大學博士研究生學位論文提取法、三氯乙酸／丙酮沉淀法、超聲破碎法等蛋白提取方法，在傳統(tǒng)電泳和改良電泳條件下進行細胞全蛋白分離，并做蛋白點計數(shù)數(shù)和凝膠重復(fù)性分析，尋找新的針對HL60細胞省時高效的雙向電泳條件。3運用比較蛋白質(zhì)組在最適電泳分離條件

2、下，分析HL60細胞在分化前，和向單核、粒系分化后的差異表達蛋白譜：依照前面優(yōu)化雙向電泳分離條件，對分化前和向單核系、粒系分化后HL60細胞總蛋白進行分離，用PDquest(70)軟件對掃描的二維凝膠電泳圖像進行分析，篩選出HL60細胞分化前后差異表達蛋白斑點。候選差異表達蛋白斑點經(jīng)膠內(nèi)胰酶酶解，MALDITOFMS分析，得到肽指紋圖譜(peptidemossfingerprinting，PMF)，使用Mascot軟件在Swisspro

3、t數(shù)據(jù)庫中檢索鑒定差異表達蛋白質(zhì)，并對差異蛋白質(zhì)進行生物信息學分析。4驗證僅出現(xiàn)在NSC67657處理組的差異蛋白點ICAT的表達差異情況，并對ICAT蛋白進行細胞內(nèi)定位：使用NSC67657和ATRA分別作用HL60細胞，誘導(dǎo)其向兩系分化，分別用RTPCR、Westernblot方法檢測細胞分化前后ICAT在mRNA與蛋白水平的變化情況；然后雙染ICAT蛋白和HL60細胞核，采用激光共聚焦的方法觀察ICAT蛋白在細胞內(nèi)的表達情況，并對