肝細胞生長因子基因轉染兔髁狀突軟骨細胞及轉染細胞對TMD的治療研究.pdf

1、目的 觀察攜帶有GFP標記的HGFcDNA的質粒體外轉染兔髁突軟骨細胞后的主要生物學特性,及其對TMD動物模型的治療效果。方法 無菌條件下取兔髁狀突軟骨細胞體外進行原代的培養(yǎng)與增殖,軟骨細胞傳至第Ⅱ代時以脂質體為載體將GFP標記的HGFcDNA轉染軟骨細胞,然后在倒置顯微鏡下觀察軟骨細胞的細胞形態(tài)變化、細胞增殖情況,瞬間細胞的轉染率,噻唑藍(MTT)法檢測軟骨細胞轉染后的增生能力,免疫組化及原位雜交法測其Ⅱ型膠原在轉染前后的變化與mRN

2、A的表達水平,HE細胞染色觀察細胞形態(tài)學的變化。通過綠色熒光光鏡下轉染細胞的瞬時計數,在視野內取100個細胞進行計數,共取10次,取其均值,得出轉染率結果。以膠原酶進行顳下頜關節(jié)腔內注射,建立TMD動物模型,將收集的轉染后的軟細胞進行關節(jié)腔內注射,并與對照組(空白質粒組)比較,通過組織切片觀察治療效果。結果 軟骨細胞的原代細胞在15%NBS的DMEM中24h后軟骨細胞開始舒展,第三天時基本完全貼壁,10d左右長滿培養(yǎng)瓶底；原代軟骨細胞為

3、多邊形和三角形,細胞輪廓清晰,核仁明顯。第二代以脂質體為載體的GFP標記的HGFcDNA轉染軟骨細胞,轉染24h后在熒光顯微鏡下可清楚的看到GFP標記的HGF進入軟骨細胞內；軟骨細胞在轉染后2代左右變的細胞狹長并逐漸變回原來的多變形、三角形,并可加速生長和促進其增殖,Ⅱ型膠原在第Ⅵ代時仍有較強表達,軟骨細胞的“退化”現象明顯推遲,而對照組軟骨細胞Ⅱ型膠原則明顯減弱,細胞形態(tài)有較大的變異。通過綠色熒光光鏡下轉染細胞的瞬時計數,基因轉染率大