酒精對人胚胎干細胞向肝細胞分化的影響.pdf

1、胚胎干細胞被廣泛的應用于生物學研究中，是生命科學研究的熱點之一。作為肝病研究的主要細胞模型，胚胎干細胞將有助于解決人肝干細胞生長緩慢、肝干細胞建系困難、肝干細胞向肝細胞分化機制及基因調(diào)控機制等臨床問題。乙醇的主要代謝器官為肝臟，酗酒是造成嚴重肝臟疾病首要因素。在歐美國家中，青年死亡的主要原因之一就是飲酒過量造成了酒精性肝病。
　　本論文運用胚胎干細胞誘導分化為肝細胞的研究模型：先從胚胎干細胞定向誘導分化到內(nèi)胚層細胞，再從內(nèi)胚層細胞

2、向肝細胞定向誘導分化，研究酒精對此過程的影響，模擬肝臟受損后啟動肝卵圓再生過程，探討酒精影響肝干細胞分化的分子機制。
　　本論文研究發(fā)現(xiàn)，在人胚胎干細胞向肝細胞定向誘導過程中，酒精抑制了人胚胎干細胞向肝細胞和膽管細胞的分化以及成熟膽管細胞的形成，同時酒精也抑制了肝臟代謝酶表達及代謝功能的建立。
　　本研究證實，酒精抑制了肝細胞分化過程中ERK信號通路，降低GSK-3β的Ser9磷酸化位點的磷酸化水平，導致轉(zhuǎn)錄因子β-cate

3、nin核定位的減少，下調(diào)其下游靶基因細胞周期蛋白Cyclin D1等的表達，最終造成細胞周期受阻。肝細胞分化過程中加入ERK信號通路抑制劑U0126，抑制了肝細胞和膽管細胞的形成，這一現(xiàn)象與酒精對誘導分化的抑制途徑相符。在此過程中U0126和生長因子HGF與FGF4的疊加，致使肝細胞誘導分化過程以及p-ERK和細胞周期蛋白Cyclin D1蛋白表達水平趨于正常，這驗證了酒精是通過抑制生長因子HGF與FGF4對ERK信號通路的激活作用，進

4、而抑制了人胚胎干細胞向肝細胞的誘導分化過程。
　　本研究表明，酒精還影響肝細胞分化過程中Wnt經(jīng)典信號通路和Notch信號通路，降低這兩個通路的活性，并抑制WNT1的表達。隨后我們在分化過程中加入Notch通路抑制劑，抑制了膽管細胞的形成，并通過上調(diào)Wnt1來促進肝細胞的形成。我們又在此過程中加入Wnt經(jīng)典信號通路抑制劑IWR-1-endo，導致肝細胞形成被抑制，并促進了膽管細胞形成。同時對肝臟代謝酶的表達與代謝功能的建立也存在抑