基于細胞凋亡相關蛋白的黃芩苷銅抗Hepg-2增殖的免疫印跡分析.pdf

1、本文比較了黃芩苷和黃芩苷銅對人肝癌細胞(HepG-2)裸鼠移植瘤生長的影響，并采用免疫印跡分析癌細胞凋亡相關蛋白的表達以研究黃芩苷銅對人肝癌細胞株HepG-2增殖、凋亡的影響，初步探討其作用機制。
　　構建HepG-2細胞裸鼠異種移植瘤模型，分析黃芩苷銅對人肝癌細胞裸鼠移植瘤的抑制作用。將裸鼠隨機分為4組:對照組、50mg/kg黃芩苷組、50mg/kg黃芩苷銅組、100mg/kg黃芩苷銅組。各組每天肌肉注射給藥相應劑量并測量繪制腫

2、瘤的生長曲線，32天后處死動物，稱重瘤塊和計算抑瘤率以評價黃芩苷銅和黃芩苷處理對HepG-2細胞裸鼠異種移植瘤的影響。利用MTT法分析黃芩苷銅對于HepG-2細胞增殖的抑制作用。采用AO染色及熒光顯微鏡觀察經(jīng)黃芩苷銅作用后，人肝癌HepG-2細胞中凋亡肝癌細胞的形態(tài)學變化。利用流式細胞儀檢測肝癌細胞凋亡率。采用PI單染流式細胞儀分析細胞周期的分布，觀察黃芩苷銅對HepG-2細胞的誘導凋亡作用;采用Western blot分析黃芩苷銅對P

3、I3K/Akt/mTOR信號通路相關蛋白、caspase-3、Bax、p38、和Bcl-2蛋白表達的影響。
　　肌肉注射黃芩苷和黃芩苷銅32天后，黃芩苷劑量為50mg/kg、黃芩苷銅劑量為50mg/kg和100mg/kg時，瘤塊重量分別為0.69±0.11g，0.6±0.17g和0.40±0.07g均明顯低于對照組(P＜0.05);對HepG-2裸鼠異種移植瘤的抑制率分別為31.7％、44.9％和65.5％。MTT實驗結果表明，給

4、予不同濃度的黃芩苷銅HepG-2細胞48h后，黃芩苷銅可以明顯抑制HepG-2細胞的增殖，且呈劑量依賴性。使用AO染色觀察細胞形態(tài)學變化，黃芩苷銅作用肝癌細胞后，細胞中出現(xiàn)細胞核固縮、核裂解、染色質聚集等細胞形態(tài)改變。AnnexinⅤ/PI雙染流式結果表明黃芩苷銅作用HepG-2細胞后，黃芩苷組的細胞凋亡率和對照組的比較有顯著性的升高，表明黃芩苷銅可以誘導HepG-2細胞凋亡。流式細胞分析細胞周期結果顯示，黃芩苷銅可將肝癌的細胞周期阻滯

5、在G2/M期，同時G0/G1期細胞減少，G2/M期的細胞增多，但S期細胞無明顯變化。Western blot分析細胞凋亡相關蛋白的實驗結果表明黃芩苷銅能下調p-PI3K、Akt、p-Akt、mTOR、p-mTOR的表達、下調casepase、p38、抑制凋亡因子Bcl-2表達的下調并上調Bax蛋白表達。
　　荷瘤實驗表明，黃芩苷銅可抑制HepG-2細胞裸鼠異種移植瘤的生長。細胞實驗結果也表明，黃芩苷銅能抑制HepG-2細胞的增殖，