香芹酚對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞增殖與凋亡的作用及其機(jī)制研究.pdf

1、從中草藥、植物中尋找有效且毒副反應(yīng)小的抗腫瘤藥物儼然已成為新世紀(jì)國(guó)內(nèi)外學(xué)者研發(fā)抗癌藥物的新方向。香芹酚已證實(shí)具有多方面的藥理作用，且對(duì)人的正常細(xì)胞毒性較小。已有多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)研究表明香芹酚能抑制多種腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，但對(duì)人肝細(xì)胞肝癌的抑制作用及其機(jī)制尚未見(jiàn)報(bào)道。
　　目的：
　　研究香芹酚對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞增殖及凋亡的影響，并初步探討其可能的分子機(jī)制。
　　方法：
　　體外培養(yǎng)肝癌HepG-2細(xì)胞及肝細(xì)胞LO-2，分

2、別以不同濃度的香芹酚作用24h，MTT法檢測(cè)香芹酚的的抗增殖效應(yīng)，Hoechst33258染色法及流式細(xì)胞術(shù)分析香芹酚誘導(dǎo)肝癌 HepG-2細(xì)胞凋亡作用，Western Blot法分析香芹酚對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、caspase-3及PARP表達(dá)的影響以及MAPK家族蛋白的各種磷酸化形式。最后，分別使用P38MAPK信號(hào)通路特異性阻斷劑SB203580阻斷P38MAPK信號(hào)通路和ERK/MAPK信號(hào)通路特異性阻斷劑

3、U0216阻斷ERKMAPK信號(hào)，通過(guò)MTT法及Hoechst33258染色法檢測(cè)其阻斷后肝癌HepG-2細(xì)胞的增殖及凋亡變化。
　　結(jié)果：
　　香芹酚對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞的抗增殖效應(yīng)表現(xiàn)出劑量依賴性，隨著香芹酚濃度的增加，細(xì)胞存活率逐漸下降，香芹酚對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞24h作用時(shí)的IC50濃度為0.32 mM，而同樣條件下香芹酚對(duì)肝細(xì)胞 LO-2細(xì)胞表現(xiàn)出低毒性。Hoechst33258核染色及流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示香

4、芹酚誘導(dǎo)了肝癌HepG-2細(xì)胞的凋亡，Hoechst33258核染色的結(jié)果顯示隨著香芹酚濃度的增加(0、0.05、0.1、0.2、0.4 mM)，HepG-2細(xì)胞呈現(xiàn)出明顯的凋亡形態(tài)改變；流式細(xì)胞儀檢測(cè)的細(xì)胞凋亡比率明顯升高，隨著濃度的升高其凋亡率依次為：3.70±0.22％、13.50±1.59%、25.80±2.18%、30.50±0.25%、50.60±3.81%。Western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)香芹酚處理肝癌HepG-2細(xì)胞24

5、 h后，Bcl-2蛋白的表達(dá)明顯減弱，且呈濃度依賴性；當(dāng)香芹酚濃度在0.2 mM以上時(shí)出現(xiàn)caspase-3的激活及cleaved PARP片斷，亦呈濃度依賴性，說(shuō)明香芹酚誘導(dǎo)肝癌HepG-2細(xì)胞凋亡與線粒體途徑相關(guān)。予以相同濃度的香芹酚處理肝癌HepG-2細(xì)胞15 min后，Western Blot結(jié)果發(fā)現(xiàn)磷酸化ERKMAPK蛋白的表達(dá)逐漸下降；磷酸化P38 MAPK亦被激活，但其蛋白表達(dá)隨濃度變化無(wú)明顯趨勢(shì)；而JNK磷酸化未被激活。

6、在阻斷ERKMAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路后，香芹酚對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞抗增殖效應(yīng)增強(qiáng)而誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)無(wú)變化；阻斷p38MAPK信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路后，香芹酚對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡作用減弱，同時(shí)抗增殖效應(yīng)減弱。
　　結(jié)論：
　　1.香芹酚具有以劑量依賴性方式抗肝癌HepG-2細(xì)胞的效應(yīng)；
　　2.抗肝癌HepG-2細(xì)胞的效應(yīng)是通過(guò)抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡；
　　3.抑制增殖及誘導(dǎo)凋亡可能與MAPK信號(hào)通路相關(guān)：其中ERKMAPK