免疫印跡技術(shù)詳細(xì)

1、Western Western Blot Blot 原理和操作方法（詳細(xì)） 原理和操作方法（詳細(xì)）$5V 工作原理 工作原理 Y| Y|
-_ -_-2IU 2IU 蛋白質(zhì)的電泳分離是重要的生物化學(xué)分離純化技術(shù)之一,電泳是指帶電粒子在電場作用下,向著與其電荷相反的電極移動的現(xiàn)象.根據(jù)所采用的支持物不同,有瓊脂糖凝膠電泳,淀粉凝膠電泳,聚丙烯酰胺凝膠電泳等.其中,聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)由于無電滲作用,樣品用量少(1-100μg

2、),分辨率高,可檢出 10-9-10-12mol 的樣品,凝膠機(jī)械強(qiáng)度大,重復(fù)性好以及可以通過調(diào)節(jié)單體濃度或單體與交聯(lián)劑的比例而得到孔徑不同的凝膠等優(yōu)點而受到廣泛的應(yīng)用. -O{`?'Q%9v SDS-PAGE 是最常用的定性分析蛋白質(zhì)的電泳方式,特別是用于蛋白質(zhì)純度檢測和測定蛋白質(zhì)分子量. }~ 和 C%=a/(a+b)*100% b=單體(arc)的重量 ;m=溶液的體積(ml) uU
o!k`l H L0
#p36e

3、
②當(dāng)分析一個未知樣品時,常常先用 7.5%的標(biāo)準(zhǔn)凝膠制成 4-10 的梯度凝膠進(jìn)行試驗,以便選擇理想的膠濃度.如果蛋白質(zhì)的分子量已知,可參考下表選擇所需凝膠濃度: RKB6&r
5
k 2OJxL“mEc 蛋白質(zhì)分子量范圍(Da) 適宜的凝膠濃度(%) rQ
9
+x
6
@fL
5 6： PMSF 1 mmoL/L goG

:
W 7： Aprotinin 1μg/ml y
CxV
6
8: leu

4、peptin 1μg/ml zkCJTa[#pt 9: pepstain 1μg/ml 7
9 ^f
|k= 其中:7,8,9 作用不持久，要使用前加入。 #G[{l-
@6 }d“]ajd\j 50 mmoL/L Tris(PH8.0) IJq
}uXh
c 2：RIPA 裂解體系：150 mmoL/L Nacl IOo
sZ
Z+5 1.0%NP-40 或 Triton-x-100 fh?] {
6+` 0.5%脫氧膽