CTLA-4基因的遺傳多態(tài)性與乙肝相關(guān)性肝病患者肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)相關(guān)性的研究.pdf

1、全世界范圍約有3.5億人慢性感染乙肝病毒(HBV),使得乙型病毒性肝炎(乙肝)成為全球?qū)θ祟愇：ψ畲蟮牟《拘约膊≈?近半個(gè)世紀(jì)以來,科技和醫(yī)療水平迅猛發(fā)展使得器官移植的臨床開展成為現(xiàn)實(shí).除了在器官保存、手術(shù)技巧及手術(shù)材料等方面的進(jìn)步,過去幾十年該領(lǐng)域的發(fā)展很大程度上得益于高效安全的抗病毒治療的應(yīng)用.隨著上世紀(jì)80年代拉米夫定的面世和乙肝免疫球蛋白的臨床應(yīng)用,肝移植目前已經(jīng)成為治療乙肝相關(guān)性終末期肝病最佳甚至唯一有效的方法.但是即使在拉

2、米夫定聯(lián)合乙肝免疫球蛋白的規(guī)范治療下,仍然有5-10﹪的乙肝相關(guān)性終末期肝病患者在接受肝移植后發(fā)生乙肝復(fù)發(fā).肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)是一個(gè)涉及復(fù)雜機(jī)理的臨床問題,抗病毒治療并不是決定乙肝相關(guān)性肝病預(yù)后的唯一因素.因此,尋找一個(gè)能夠預(yù)測(cè)個(gè)體抗病毒免疫能力的的指標(biāo),對(duì)于判定肝臟移植預(yù)后和擬定預(yù)防乙肝復(fù)發(fā)的個(gè)性化治療方案具有相當(dāng)重要的臨床意義.早在上世紀(jì)90年代就有學(xué)者在肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)患者的肝臟活檢病理中發(fā)現(xiàn)HBV特異性的CD4+T淋巴細(xì)胞,由

3、此認(rèn)為即使是免疫抑制劑的應(yīng)用下,肝移植受體體內(nèi)仍維持有一定的HBV特異性T細(xì)胞免疫,對(duì)于清除殘余HBV有重要作用. 原始T淋巴細(xì)胞的活化主要依靠雙信號(hào)刺激:抗原肽-主要組織相容性復(fù)合物與T細(xì)胞表面受體結(jié)合產(chǎn)生的抗原特異性信號(hào)以及由CD28分子和抗原遞呈細(xì)胞表面的B7家族分子(CD80與CD86)相結(jié)合產(chǎn)生的共刺激信號(hào).細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原(Cytotoxic T Lymptlocyte associated antigen-4,C

4、TLA-4)是T細(xì)胞表面激活分子,主要表達(dá)在激活的T細(xì)胞上,能與抗原遞呈細(xì)胞(APC)表面的B7家族分子結(jié)合,作為協(xié)同刺激信號(hào)抑制T細(xì)胞增生、活化,對(duì)T細(xì)胞增生起負(fù)性調(diào)節(jié)作用.近年研究認(rèn)為,CTIA-4對(duì)B7家族分子的親和力遠(yuǎn)高于CD28,是CD28對(duì)于B7分子的重要競(jìng)爭(zhēng)性拮抗劑.CTLA-4分子通過結(jié)合B7分子能明顯地抑制IL-2的產(chǎn)生和T淋巴細(xì)胞活化的周期,是一種與機(jī)體免疫功能有關(guān)的強(qiáng)代表物.已發(fā)現(xiàn)CTLA-4基因有6個(gè)多態(tài)性位點(diǎn):

5、①啟動(dòng)子-1722T/C二態(tài)性:②啟動(dòng)子-1662A/G二態(tài)性;③啟動(dòng)子-658C/T二態(tài)性:④啟動(dòng)子-318位點(diǎn)C/T二態(tài)性:⑤外顯子1第17密碼子49位點(diǎn)A/G二態(tài)性;⑥外顯子4的3'非翻譯區(qū)6230位點(diǎn)的(AT)可變重復(fù)序列,其中49位點(diǎn)的A/G二態(tài)性近年來被大量研究證實(shí)與多種免疫相關(guān)性疾病有關(guān),如胰島素依賴性Ⅰ型糖尿病、Grayes病、重癥肌無力、白斑、多發(fā)性硬化、子宮內(nèi)膜異位癥(endometriosis,EMs)、自身免疫性

6、肝炎、原發(fā)性硬化性膽管炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡,以及移植后排斥反應(yīng)等.同時(shí),完整的CTLA-4信號(hào)通路對(duì)于自發(fā)性與治療誘導(dǎo)的移植物耐受也至關(guān)重要.最近,尚有國(guó)外學(xué)者從遺傳和免疫學(xué)角度探討了乙型病毒性肝炎的發(fā)病機(jī)理,發(fā)現(xiàn)CTIA-4 +49遺傳多態(tài)性能夠決定特定人群對(duì)于乙肝的易感性,其GG基因型攜帶者機(jī)體內(nèi)存在較強(qiáng)的HBV特異性免疫功能,感染HBV的機(jī)會(huì)大大低于該位點(diǎn)其他基因型的攜帶者. 鑒于CTLA-4對(duì)機(jī)體抗HBV免疫的作用和對(duì)移植

7、后免疫功能的影響,我們推測(cè),CTLA-4基因的遺傳多態(tài)性可能與肝移植術(shù)后受體的HBV特異性細(xì)胞免疫活化有關(guān).本研究通過對(duì)受體的CTLA-4基因進(jìn)行多態(tài)性分析,旨在探討CTLA～4基因的遺傳多態(tài)性與乙肝相關(guān)性終末期肝病患者肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)的個(gè)體間差異是否存在相關(guān)性,并且評(píng)價(jià)受體CTLA-4基因的遺傳多態(tài)性對(duì)這種差異所產(chǎn)生的影響.從而為判斷乙肝相關(guān)性肝病患者肝移植預(yù)后和擬定個(gè)性化治療方案提供參考. 方法:選取我中心2003年7月至

8、2005年6月因乙肝相關(guān)性終末期肝病接受尸體供肝肝移植的167例患者作為研究對(duì)象.所有患者圍手術(shù)期及術(shù)后接受統(tǒng)一的拉米夫定聯(lián)合乙肝免疫球蛋白治療預(yù)防乙肝復(fù)發(fā).受體的基因組DNA由移植中取出的受體肝臟組織中分離提取.PCR擴(kuò)增CTLA-4基因,以特異性引物進(jìn)行PCR-RFLP測(cè)序,采用限制性片斷長(zhǎng)度多態(tài)性(RFLP)方法和DNA直接測(cè)序法分別檢測(cè)判定受體CTLA-4基因+49單核苷酸多態(tài)性位點(diǎn)基因型,并以直接測(cè)序法檢驗(yàn)結(jié)果. 患者

9、根據(jù)術(shù)后有無乙肝復(fù)發(fā)分為兩組.比較受體CTLA-4基因+49位點(diǎn)的多態(tài)性與術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)的相關(guān)性.在多因素分析中加入本組研究對(duì)象的其他危險(xiǎn)因素(術(shù)前血清HBV DNA濃度、術(shù)后血清HBsAb滴度等)與乙肝復(fù)發(fā)的關(guān)系,以判斷CTLA-4+49位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性對(duì)乙肝復(fù)發(fā)的影響大小. 實(shí)驗(yàn)所得數(shù)據(jù)的統(tǒng)計(jì)學(xué)處理用SPSSl3.0統(tǒng)計(jì)軟件完成,組間比較采用卡方檢驗(yàn)統(tǒng)計(jì)法分析.兩組之間的HBV DNA濃度和HBsAb滴度比值的比較采用Man

10、n-Whitney U法檢驗(yàn),P<0.05為差異有顯著性. 結(jié)果: 患者平均年齡46±8.3歲(26-67歲),男性占多數(shù).原發(fā)肝臟疾病主要為乙肝相關(guān)性肝硬化、肝細(xì)胞肝癌和暴發(fā)性肝炎.肝移植術(shù)后,病人平均隨訪25個(gè)月.167例受體中有24例受體發(fā)生乙肝復(fù)發(fā),平均復(fù)發(fā)時(shí)間為8個(gè)月(1-33個(gè)月).總體乙肝復(fù)發(fā)率為14.4﹪. CTLA-4+49位點(diǎn)基因型分布在復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組間有顯著性差異(P=0.032).浙江大

11、學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院在該多態(tài)性位點(diǎn)攜帶GG、GA和AA三種基因型的患者,其乙肝復(fù)發(fā)率分別為6.67﹪(5/75),19.7﹪(15/76)與25﹪(4/20).同時(shí),等位基因的分布在復(fù)發(fā)組與未復(fù)發(fā)組間也有顯著性差異(P=0.013,OR 2.176,95﹪CI 1.170-4.046).G、A等位基因在未復(fù)發(fā)組中分別占70.3﹪和29.7﹪,相應(yīng)地在復(fù)發(fā)組中分別占52.8﹪和47.2﹪. 進(jìn)一步分析一系乙肝復(fù)發(fā)與本研究人群一系列

12、危險(xiǎn)因素的關(guān)系(包括術(shù)前受體血清HBV DNA濃度,術(shù)后受體血清HBsAb滴度),并將其與CTLA-4+49位點(diǎn)單核苷酸多態(tài)性納入多因素分析,發(fā)現(xiàn)僅有CTLA-4+49位點(diǎn)基因型與受體術(shù)后血清抗體滴度(P=0.004)與肝移植后乙肝復(fù)發(fā)獨(dú)立相關(guān).而術(shù)前血清抗體滴度在本研究組中并非乙肝復(fù)發(fā)的獨(dú)立危險(xiǎn)因素. 結(jié)論: 1. 乙肝相關(guān)性終末期肝病患者肝移植術(shù)后乙肝復(fù)發(fā)機(jī)理復(fù)雜,涉及多種因素,不同個(gè)體間存在較大差異. 2.