家蠶泛素基因的多態(tài)性與野蠶泛素基因的克隆及原核表達.pdf

1、泛素是一個由76個氨基酸組成的高度保守的多肽鏈，由于其廣泛分布于各類細胞中而被稱遍在蛋白。其相對分子質(zhì)量約為8.6 kDa，從不同種屬的真核生物中得到的泛素一級結(jié)構(gòu)幾乎相同。目前已知泛素主要是通過泛素一蛋白酶體途徑高效并高度選擇性地對細胞質(zhì)和細胞核內(nèi)的蛋白尤其是短命蛋白等進行降解。許多鱗翅目昆蟲在變態(tài)過程中，短期內(nèi)不僅要合成新蛋白質(zhì)，還要降解異常的、舊的蛋白質(zhì)，這樣才能使生命體保持平衡。野桑蠶和其它鱗翅目昆蟲有相近的生態(tài)習(xí)性，其體內(nèi)蛋白

2、質(zhì)的代謝途徑極其復(fù)雜。因此，野蠶泛素基因及其表達的研究對了解昆蟲的蛋白質(zhì)代謝途徑具有一定的指導(dǎo)意義。 許多昆蟲的泛素蛋白都是由泛素基因家族(UBl1、IBI2、UBI3、UBI4)編碼的。本研究從家蠶基因庫中發(fā)現(xiàn)了1條可同時編碼15個單體泛素的DNA序列(No．AADK010193r8)，這15個單體泛素基因雖然在堿基水平上的一定差異，但在氨基酸水平上是保守的。用野蠶基因組DNA作模板，泛素基因得到了擴增，表明泛素基因內(nèi)部沒有內(nèi)

3、含子插入。以野桑蠶體壁細胞的eDNA為模板，利用PCR技術(shù)擴增了單體泛素基因的編碼區(qū)，該序列提交GenBank，登錄號DQ839401。序列分析表明，該編碼區(qū)的長度為231 bp，編碼76個氨基酸，編碼蛋白的相對分子質(zhì)量約為8.6 kDa，等電點為5.73。同源性比較發(fā)現(xiàn)，野桑蠶泛素基因與其他真核生物泛素基因在核苷酸水平上有83％同源性，在氨基酸水平上具有94％以上的相似性。將野桑蠶泛素基因片段與pGEX-4T-2連接，構(gòu)建原核表達載體