葡萄SAMS基因的克隆、原核表達(dá)及分析.pdf

1、植物在生長發(fā)育過程中，會遭受不同的生物和非生物脅迫，例如病蟲害、干旱、傷害、低溫，以及高鹽等。作物在遭受逆境脅迫時，其正常生長發(fā)育會受到影響，作物質(zhì)量和產(chǎn)率都會有所下降，直接或間接導(dǎo)致經(jīng)濟(jì)利潤的下降?，F(xiàn)在，人口不斷增長以及環(huán)境惡化，自然災(zāi)害不斷發(fā)生，作為具有重要經(jīng)濟(jì)價值的水果一葡萄，其品種培育和科學(xué)栽培管理等問題越來越受到了人們的關(guān)注。因此，葡萄抗逆新品種的培育成為了葡萄栽培種抵御不良環(huán)境脅迫的最行之有效的方法之一。
　　本研究以

2、歐洲葡萄(Vitis vinifera)為研究材料，以歐洲葡萄中的S-腺苷甲硫氨酸合成酶(S-adenosylmethionine synthetase，SAMS)為研究對象展開了研究，研究內(nèi)容和結(jié)果如下:
　　1.對葡萄基因組數(shù)據(jù)庫（http://compbio.dfci.harvard.edu/tgi/cgi-bin/tgi/Blast/index.cgi）進(jìn)行檢索分析，獲得了5個包含有完整ORF區(qū)和保守結(jié)構(gòu)域的VvSAMS基

3、因，并對其進(jìn)行了初步的生物信息學(xué)分析。分析結(jié)果顯示，這5個VvSAMS蛋白都包含有SAMS典型的N端結(jié)構(gòu)域、中間結(jié)構(gòu)域和C端結(jié)構(gòu)域;且都不具有信號肽和跨膜結(jié)構(gòu)域，都不是分泌蛋白，也不是膜蛋白;其二級結(jié)構(gòu)主要由α螺旋和隨機(jī)卷曲組成。相似性分析結(jié)果顯示，得到的這5個葡萄SAMS基因與擬南芥SAMS基因分別存在不同程度的相似性，這對于我們深入研究VvSAMS基因的結(jié)構(gòu)以及功能等都具有重要理論參考價值。
　　2.以歐洲葡萄葉片為材料，克隆

4、得到兩個含有完整開放閱讀框(ORF)的VvSAMS1基因和VvSAMS3基因。
　　3.用SA、MeJA和創(chuàng)傷處理葡萄葉片，通過實(shí)時熒光定量PCR的方法，分析了VvSAMS1基因的表達(dá)量的變化。分析結(jié)果顯示，不同脅迫處理?xiàng)l件下，其相對表達(dá)量均發(fā)生了變化，并且呈現(xiàn)出一定的規(guī)律性。這表明VvSAMS1基因與植物抗逆性存在一定關(guān)系。
　　4.成功構(gòu)建了葡萄VvSAMS1基因的原核表達(dá)載體，并將重組子轉(zhuǎn)入到大腸桿菌BL21中，利用I