羅格列酮對人肝癌SMMC7721細胞裸鼠移植瘤的影響及其機制研究.pdf

1、目的：通過建立人肝癌 SMMC7721細胞裸鼠移植瘤模型，研究羅格列酮（ROZ）對裸鼠移植性SMMC7721人肝癌細胞增殖的影響，并初步探討其作用機理。
　　方法：
　　1.人肝癌SMMC7721細胞裸鼠移植瘤模型的建立與分組：BALB/C裸小鼠分別于背側(cè)后部皮下接種0.2ml/只（相當于1×107個細胞）。20只實驗裸鼠分為4組，即生理鹽水（NS）組、5-氟尿嘧啶(5-Fu)對照組、羅格列酮（ROZ）治療組、5-Fu+RO

2、Z聯(lián)合治療組。成瘤后，NS組腹腔注射生理鹽水，5-Fu對照組腹腔注射5-Fu（20 mg/kg）、ROZ治療組腹腔注射ROZ（25 mg/kg）、5-Fu+ROZ聯(lián)合治療組腹腔注射5-Fu（20 mg/kg）和ROZ（25 mg/kg）。各組均隔日腹腔注射給藥。
　　2.評價羅格列酮治療人肝癌的有效性：觀察移植瘤生長情況，測裸鼠體重和移植瘤體積；處死后，稱瘤重、測體積，計算抑瘤率；光鏡、電鏡觀察移植瘤形態(tài)變化；流式細胞術(shù)檢測移植瘤

3、細胞周期分布；Western blot檢測移植瘤組織中PPARγ、Cyclin D1、p21WAF1/Cip1、磷酸化Rb、總Rb蛋白表達變化。
　　結(jié)果：
　　1.成功建立了人肝癌細胞裸鼠異種移植瘤模型。NS組平均瘤重3.071g，5-Fu對照組平均瘤重1.512g，瘤重抑瘤率50.1％；ROZ治療組平均瘤重1.576g，瘤重抑瘤率48.7%；5-Fu+ROZ聯(lián)合治療組平均瘤重1.033g，瘤重抑瘤率66.4%；與NS組比

4、較，差異有統(tǒng)計學意義。
　　2.與NS組相比，各處理組移植瘤細胞異型性降低，癌巢較清楚，癌細胞大小較均勻，病理性核分裂相減少，可見凋亡小體，癌巢中可見大片的出血和壞死。
　　3.流式細胞儀檢測結(jié)果顯示，各處理組處于G0/G1期細胞含量明顯增多，S期細胞影響不大，而 G2/M期細胞則明顯減少，并出現(xiàn)較高的亞二倍體峰，與NS組比較差異有統(tǒng)計學意義，發(fā)生了 G1期阻滯，以 ROZ與5-Fu合用時，其阻滯作用更明顯。
　　4.

5、 Western blot分析顯示：四組移植瘤組織中均有 PPARγ蛋白的表達，而在經(jīng)ROZ、5-Fu以及兩者聯(lián)合應用處理之后，移植瘤組織中PPARγ蛋白的表達有所增高；移植瘤組織中 Cyclin D1蛋白表達明顯降低，p21WAF1/Cip1蛋白表達明顯增高；總Rb蛋白的表達受處理因素影響較小，而各處理組移植瘤組織中 Rb蛋白的磷酸化水平明顯降低；且顯示以上各蛋白表達的改變以5-Fu+ ROZ治療組最為顯著，ROZ治療組與5-Fu對照