鎘對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC7721的毒性機(jī)理研究.pdf

1、揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文鎘對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC7721的毒性機(jī)理研究姓名：陳大偉申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：博士專業(yè)：臨床獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉宗平2011052揚(yáng)州大學(xué)博士學(xué)位論文ROS、GSH及MDA含量；同時(shí)檢測(cè)了NAC對(duì)鎘致肝癌細(xì)胞凋亡及LDH釋放的影響。結(jié)果表明，ROS升高主要發(fā)生在染毒后2h，顯著或極顯著高于對(duì)照組(Po05或P001)；染毒12h時(shí)，10和20rtmol／L染毒組細(xì)胞內(nèi)GSH含量極顯著低于對(duì)照組(尸o01)；20Imaol／L劑量

2、組MDA含量顯著高于對(duì)照組(尸O05)。染毒24h時(shí)，GSH隨鎘濃度增高而降低，顯著或極顯著低于對(duì)照組(P005或P001)；MDA含量則隨鎘染毒濃度升高而升高，并極顯著高于對(duì)照組(P001)。與染毒組比較，在鎘染毒同時(shí)添加NAC能顯著降低細(xì)胞上清中LDH活性，減少凋亡細(xì)胞比例。表明氧化應(yīng)激在鎘致肝癌細(xì)胞損傷過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。3鎘對(duì)肝癌細(xì)胞SMMC7721線粒體的影響1、25、5、10、20xmol／L醋酸鎘處理SMMC7721細(xì)胞

3、，測(cè)定了染毒12h和24h后線粒體膜電位的變化，觀察了染毒24h線粒體超微結(jié)構(gòu)，同時(shí)對(duì)線粒體損傷相關(guān)基因Bcl2、Bax、CytC、Caspase9、Caspse3的mRNA相對(duì)表達(dá)水平及蛋白表達(dá)水平的變化進(jìn)行了測(cè)定。結(jié)果表明，染毒12h線粒體膜電位變化不顯著，染毒24h5amoFL以上組線粒體膜電位顯著或極顯著低于對(duì)照組(PO05或P001)。超微結(jié)構(gòu)顯示，隨著鎘染毒濃度的增加線粒體出現(xiàn)嵴斷裂，空泡化，嚴(yán)重時(shí)發(fā)生崩解。Bel2mRNA

4、相對(duì)表達(dá)量隨染毒濃度增加而降低，bax表達(dá)變化與之相反，Westernblot結(jié)果呈現(xiàn)同樣的變化規(guī)律；細(xì)胞免疫組織化學(xué)檢測(cè)Cytc表達(dá)隨染毒濃度升高表達(dá)量增加，Westernblot檢測(cè)無(wú)差異；Caspase9mRNA相對(duì)表達(dá)量隨染毒濃度升高而增加，并顯著高于對(duì)照組(腳01)。10ttmol／LCd組Caspse一3mRNA相對(duì)表達(dá)量顯著低于對(duì)照組(P005)，其余染毒組與對(duì)照組比較無(wú)顯著差異(胗005)。表明線粒體凋亡途徑參與了鎘致肝

5、癌細(xì)胞的損傷。4鎘致肝癌細(xì)胞SMMC7721損傷的蛋白質(zhì)組學(xué)研究選擇10pmol／LCd染毒24h建立鎘致肝癌細(xì)胞損傷模型，通過(guò)提取細(xì)胞總蛋白和雙向凝膠電泳對(duì)蛋白質(zhì)進(jìn)行分離，共有24個(gè)蛋白點(diǎn)出現(xiàn)顯著的差異表達(dá)，包括7個(gè)新增點(diǎn)，11個(gè)上調(diào)點(diǎn)，6個(gè)下調(diào)點(diǎn)。采用MALDITOFMS質(zhì)譜法對(duì)24個(gè)差異表達(dá)蛋白點(diǎn)進(jìn)行質(zhì)譜分析，結(jié)果成功鑒定了23個(gè)蛋白點(diǎn)，對(duì)應(yīng)23種蛋白質(zhì)。它們是肽酰脯氨酰順?lè)词疆悩?gòu)酶FKBP4、角蛋白8、熱休克蛋白27、蛋白酶激活