血壓波動性增高對阿司匹林抗血小板作用的影響.pdf

1、目的:
　　研究血壓波動性(BPV)增高對阿司匹林(Asp)抗血小板作用的影響及機(jī)制。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)分為在體實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)兩部分。
　　1.在體實(shí)驗(yàn)將Sprague-Dawley(SD)大鼠行去竇弓神經(jīng)(SAD)或假手術(shù)(Sham)，隨機(jī)分為8組:Sham組、SAD組、Sham+Asp低劑量組(5mg/kg)、SAD+Asp低劑量組(5mg/kg)、Sham+Asp中劑量組(15mg/kg)、SAD+As

2、p中劑量組(15mg/kg)、Sham+Asp高劑量組(45mg/kg)、SAD+Asp高劑量組(45mg/kg)，n=6。術(shù)后四周，在清醒自由活動狀態(tài)下，檢測血壓(BP)、BPV和壓力感受性反射敏感性(BRS)的變化。Asp每日灌胃給藥，Sham組和SAD組大鼠灌胃等體積的溶媒，連續(xù)7天后，處死大鼠心臟取血，取肝素抗凝血，利用比濁法測定二磷酸腺苷(ADP)、膠原、凝血酶、花生四烯酸（AA）誘導(dǎo)的血小板聚集率;應(yīng)用小室灌流技術(shù)檢測在高切

3、變率(1200s-1)和低切變率(300s-1)下血小板對膠原的黏附率;采用流式細(xì)胞技術(shù)測定血小板表面P-選擇素表達(dá)、活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)以及鈣離子(Ca2+)平均熒光強(qiáng)度;取EDTA-消炎痛抗凝血，放免法檢測血漿TXB2含量，AA誘導(dǎo)下測定血小板環(huán)氧化酶(COX)活性。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)取SD大鼠肝素抗凝血，隨機(jī)分為8組:非波動組、波動組、非波動+Asp低濃度組(10μg/ml)、波動+Asp低濃度組(10μg/m

4、l)、非波動+Asp中濃度組(30μg/ml)、波動+Asp中濃度組(30μg/ml)、非波動+Asp高濃度組(100μg/ml)、波動+Asp高濃度組(100μg/ml)，n=5。Asp(非波動組、波動組應(yīng)用等體積溶媒)和血液在37℃孵育15min后，進(jìn)入體外壓力波動模型5min，利用流式細(xì)胞技術(shù)檢測血小板微聚集率和上述相應(yīng)指標(biāo)，應(yīng)用小室灌流技術(shù)測定血小板黏附率。
　　結(jié)果:
　　1.在體實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　1.1.SAD

5、大鼠血流動力學(xué)和BRS變化與Sham組比較，SAD組大鼠SBP、DBP和MBP無明顯差異，但是SBPV、DBPV和MBPV均顯著增高，BRS顯著降低，表明SAD大鼠呈單純性BPV增高狀態(tài)，且動脈壓力感受性反射功能明顯受損。
　　1.2.血壓波動性增高對Asp抗血小板作用的影響①與相應(yīng)Sham組比較，SAD(Asp0、5、15mg/kg)組大鼠血小板聚集率、黏附率、血小板表面P-選擇素陽性表達(dá)率、血漿TXB2含量及COX活性均顯著升

6、高;②與Sham+Asp(45mg/kg)組比較，SAD+Asp(45mg/kg)組大鼠血小板聚集率、黏附率、血小板表面P-選擇素陽性表達(dá)率、COX活性、血漿中TXB2含量均無顯著差異;③與SAD+Asp(0mg/kg)組比較，SAD+Asp(45mg/kg)組大鼠上述指標(biāo)均顯著降低。
　　1.3.血小板COX活性及ROS、NO、Ca2+水平變化①與相應(yīng)Sham組比較，SAD(Asp0、5、15mg/kg)組大鼠血小板COX活性升

7、高，血小板ROS、Ca2+平均熒光強(qiáng)度增高，NO平均熒光強(qiáng)度降低。②與相應(yīng)Sham+Asp(45mg/kg)組比較，SAD+Asp(45mg/kg)組大鼠血小板COX活性以及ROS、Ca2+、NO平均熒光強(qiáng)度無顯著差異;③與SAD+Asp(0mg/kg)組比較，SAD+Asp(45mg/kg)組大鼠血小板COX活性以及ROS、Ca2+平均熒光強(qiáng)度降低，NO平均熒光強(qiáng)度升高。
　　2.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果
　　2.1.壓力和壓力波動性

8、變化與非波動組比較，波動組的SBP、DBP和MBP無明顯差異，但SBPV、DBPV和MBPV均顯著增高。表明模擬SAD大鼠BPV增高的體外模型是成功的。
　　2.2.壓力波動性增高對阿司匹林抗血小板作用的影響①與相應(yīng)非波動組比較，波動組(Asp0、10、30μg/ml)血小板表面P-選擇素陽性表達(dá)率、微聚集率和黏附率均顯著升高;②與非波動+Asp(100μg/ml)組比較，波動+Asp(100μg/ml)組血小板表面P-選擇素陽性

9、表達(dá)率、微聚集率和黏附率均無顯著差異;③與波動+Asp(0μg/ml)組比較，波動+Asp(100μg/ml)組血小板表面P-選擇素陽性表達(dá)率、微聚集率和黏附率均顯著降低。
　　2.3.血小板ROS、NO、Ca2+探針熒光強(qiáng)度的變化①與相應(yīng)非波動組比較，波動組(Asp0、10、30μg/ml)血小板ROS、Ca2+平均熒光強(qiáng)度增高，NO的平均熒光強(qiáng)度降低;②與非波動+Asp(100μg/ml)組比較，波動+Asp(100μg/ml