惡性腦膠質(zhì)瘤亞臨床腫瘤分割照射方案優(yōu)化及機制的實驗研究.pdf

1、第一部分:惡性腦膠質(zhì)瘤亞臨床腫瘤分割照射方案優(yōu)化的實驗研究
　　 目的:比較不同分割照射方案照射后惡性腦膠質(zhì)瘤亞臨床腫瘤的成瘤率差別及腫瘤生長情況,篩選合理適用的惡性腦膠質(zhì)瘤亞臨床腫瘤分割照射的優(yōu)化方案,為臨床更好地開展腦膠質(zhì)瘤術(shù)后放療提供實測實驗依據(jù)。
　　 材料與方法:采用人腦膠質(zhì)母細胞瘤裸小鼠亞臨床腫瘤為實驗模型進行不同分割方案照射(常規(guī)分割照射方案2Gy/d×5/w；非常規(guī)分割照射方案:1.6Gyx2/dx5/w

2、、4Gyx3/w、3Gy/d×5/w,總劑量分別為40Gy和60Gy)及靶向藥泰欣生(0.5mg/只/周,共7周)聯(lián)合放射線照射(常規(guī)分割,總劑量60Gy)。觀察指標:1)照射療程結(jié)束時腫瘤形成率,2)腫瘤平均復發(fā)時間,3)最終成瘤率(18-24周實驗結(jié)束時)。
　　 結(jié)果:(1)在接種細胞數(shù)為2.2×105,空白對照組成瘤率為87.5％(7/8)的情況下,總劑量40Gy時,照射結(jié)束時常規(guī)分割組(第5周)、1.6Gyx2/dx5

3、/w組(第4周)及4Gyx3/w組(第4周)的成瘤率分別為75％、25％和0,腫瘤復發(fā)時間分別為96天、109天和102天,至觀察結(jié)束時(第18周)三組的腫瘤成瘤率分別為100％、100％和100％,無論何種分割方案40Gy的照射總劑量均未能有效控制亞臨床腫瘤的不斷生長；(2)在接種細胞數(shù)為3.1×105空白對照組成瘤率為100％情況下,總劑量60Gy照射結(jié)束時常規(guī)分割組(第7周)、1.6Gyx2/dx5/w組(第5周)、4Gyx3/w

4、組(第6周)及3Gyx5/w組(第5周)的成瘤率分別為100％、0、0和0,腫瘤復發(fā)時間分別為103天、131天、110天和124天,至觀察結(jié)束時(第24周)各組成瘤率分別為100％、75％、100％和100％；(3)泰欣生單純給藥組(0.5mg/只/周和1mg/只/周)、單純照射組(常規(guī)分割照射,總劑量60Gy)及放化聯(lián)合組照射結(jié)束時各組的成瘤率分別為100％、100％、100％和75％,腫瘤平均復發(fā)時間分別為:31天、46天、103

5、天和97天。至觀察結(jié)束時(第24周)各組成瘤率均為100％。
　　 結(jié)論:(1)對近期療效而言,在空白對照組成瘤率為87.5％的條件下,40Gy的照射總劑量即可取得一定亞臨床腫瘤的近期控制率,其中大分割組(4Gy×3/w)最好,但遠期療效均不理想。實驗結(jié)果顯示,至觀察結(jié)束時(第18周)各實驗組的成瘤率均為100％,表明40Gy的總劑量只能延緩腫瘤復發(fā)的時間,但未取得治愈的效果,因此對腫瘤生長控制而言,40Gy總劑量是不夠的。(2

6、)將總照射劑量提高到60Gy,腦膠質(zhì)瘤的遠期控制有一定提高。1.6Gy×2/d×5/w組的遠期控制率為25％。(3)在總照射劑量相同情況下,靶向藥泰欣生聯(lián)合常規(guī)分割放射線照射的近期療效好于單純給藥和單純常規(guī)分割放射治療[療程結(jié)束時(第7周)成瘤率分別為75％、100％和100％],差于非常規(guī)單純放療組(各非常規(guī)分割照射組60Gy療程結(jié)束時的成瘤率均為0)。表明泰欣生聯(lián)合常規(guī)分割放射治療腦膠質(zhì)瘤效果不佳,可能與EGFR表達陰性有關(guān)。

7、>　　 第二部分:干細胞標記技術(shù)測定體外培養(yǎng)腦膠質(zhì)母細胞瘤(BT325)細胞系干細胞數(shù)的初步研究
　　 目的:通過與經(jīng)典干細胞識別方法——細胞克隆形成分析法結(jié)果的比較,探討用現(xiàn)代分子生物學干細胞標記技術(shù)測定腦膠質(zhì)瘤細胞群中干細胞數(shù)量的可行性。
　　 材料和方法:實驗采用指數(shù)生長期的人腦膠質(zhì)母細胞瘤BT325細胞系(北京神經(jīng)外科研究所建立),用經(jīng)典單細胞克隆形成分析法測定細胞克隆形成率；用現(xiàn)代分子生物學干細胞標記技術(shù)(流

8、式細胞術(shù)和免疫組化法)測定BT325細胞中干細胞標記物(CD133)陽性細胞標記率及裸小鼠移植瘤組織中干細胞標記物(CD133、Nestin)的表達并對經(jīng)典和現(xiàn)代干細胞鑒別技術(shù)的測定結(jié)果進行分析和比較。
　　 結(jié)果:實驗結(jié)果顯示:(1)當反應體系中CD133抗體含量分別為0.45μg/100μl、0.9μg/100μl、1.8μg/200μl時人腦膠質(zhì)母細胞瘤 BT325細胞系CD133陽性細胞比例分別為0.62％、2.55％、

9、0.067％,PBS組為0.1％、0.1％、和0％,PE組為0.9596、0.3％和0.1％,各組間差異無顯著性(P=0.311和P=0.473)；(2)免疫組化的分析結(jié)果顯示BT325裸小鼠移植瘤組織中未見CD133表達,少許細胞nestin表達陽性；(3)與干細胞分子標志物測定同步進行的單細胞克隆形成分析法的測定結(jié)果顯示體外培養(yǎng)的人腦膠質(zhì)母細胞瘤細胞(BT325)的克隆形成率為39.25％±11.35。
　　 結(jié)論:同步進行