NF-κB、MAPKs等信號(hào)通路在TMT致神經(jīng)元損害中的作用與機(jī)制研究.pdf

1、20世紀(jì)80年代中期以來(lái)，世界各地相繼在多種樣本如海水、海洋生物、海洋底泥、城市污水、河水中證實(shí)了有機(jī)錫化合物的存在。以往TMT中毒主要是由于職業(yè)接觸，近年來(lái)除了職業(yè)中毒外，通過(guò)生活用品、飲用水、食物中毒的事件也有報(bào)導(dǎo)。有機(jī)錫化合物廣泛用于船舶行業(yè)，海洋生態(tài)環(huán)境中存在大量的TMT，對(duì)水產(chǎn)生物動(dòng)物造成嚴(yán)重的影響，且TMT有生物蓄積作用，人類食用海產(chǎn)品可能引起TMT中毒，因此TMT由工業(yè)毒物逐漸轉(zhuǎn)變?yōu)榄h(huán)境污染物，影響人類的日常生活。

2、　　文章通過(guò)建立TMT中毒的體外細(xì)胞模型,研究TMT對(duì)細(xì)胞的毒性作用及NF-κB、MAPKs等信號(hào)通路的影響。采用了MTT法測(cè)定細(xì)胞存活率;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡;免疫細(xì)胞化學(xué)、免疫熒光技術(shù)、WB檢測(cè)NF-κB信號(hào)通路的激活;免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)Ub的變化;WB檢測(cè)MAPKs、p-Akt、Bcl-2、XIAP等蛋白的變化。結(jié)果表明TMT引起SH-SY5Y細(xì)胞泛素表達(dá)增加,IκBα降解,NF-κB p65核轉(zhuǎn)位增加,p-ERK1/2、p-JN

3、K、p-p38增加,p-Akt降低,提示NF-κB、UPPs、MAPKs、Akt信號(hào)通路可能參與TMT的毒作用機(jī)制。
　　通過(guò)以不同信號(hào)通路的特異性抑制劑為工具,從蛋白表達(dá)層面研究TMT致細(xì)胞凋亡模型中NF-κB與MAPKs等其他信號(hào)通路的“Cross-talk”,并觀察各抑制劑對(duì)TMT致細(xì)胞凋亡的影響,試圖探明其毒性途徑，來(lái)說(shuō)明TMT致SH-SY5Y凋亡模型中NF-κB與MAPKs等其他信號(hào)通路的“Cross-talk”。采用M

4、G132、BAY11-7082、SP600125、U0126、LY294002分別預(yù)處理SH-SY5Y細(xì)胞2h,TMT染毒24h的方法,提取蛋白,WB檢測(cè)蛋白表達(dá)變化;流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)各抑制劑對(duì)TMT導(dǎo)致的細(xì)胞凋亡的影響。表明在TMT致細(xì)胞凋亡模型中,NF-κB、泛素蛋白酶體信號(hào)通路的激活可使Bcl-2、XIAP表達(dá)增加,具有拮抗細(xì)胞凋亡的作用,泛素蛋白酶體信號(hào)通路參與NF-κB的激活;而JNK、ERK1/2信號(hào)通路的激活使Bcl-2、X

5、IAP表達(dá)減少,則促進(jìn)細(xì)胞凋亡。
　　途徑研究表明各信號(hào)通路間存在“Cross-talk”: NF-κB與JNK信號(hào)通路相互抑制,JNK與ERK1/2信號(hào)通路間相互抑制,JNK促進(jìn)p38信號(hào)通路的激活,而ERK1/2與NF-κB則抑制p38信號(hào)通路,ERK1/2對(duì)NF-κB信號(hào)通路也有抑制作用。這些信號(hào)通路間相互調(diào)節(jié),最終結(jié)局為 TMT使Bcl-2、XIAP蛋白表達(dá)減少,凋亡發(fā)生。
　　通過(guò)建立TMT中毒的體內(nèi)模型,研究TM

6、T對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響。將40只雄性SD大鼠隨機(jī)分為4組,每組10只;TMT染毒劑量分別為0.75、1.5、3mg/kg以及溶劑對(duì)照組(雙蒸水);每日上午8點(diǎn)經(jīng)口灌胃染毒,下午兩點(diǎn)進(jìn)行水迷宮實(shí)驗(yàn),晚上8點(diǎn)進(jìn)行一般行為學(xué)評(píng)分與癲癇評(píng)分,共6天;末次染毒24h后斷頭處死動(dòng)物,收集血液,分離血清,測(cè)定血液生化指標(biāo)及血清鉀離子濃度;分離臟器,計(jì)算臟器系數(shù);每只動(dòng)物大腦一分為二,一半用于制備石蠟切片,一半分離海馬、皮層等,凍存?zhèn)溆谩＝Y(jié)果表明,

7、3mg/kgTMT可引起SD大鼠中毒,觀察到震顫、易激惹、攻擊性、癲癇發(fā)作等癥狀,以及血清鉀離子濃度明顯下降等特異性中毒特征,TMT對(duì)學(xué)習(xí)記憶能力也有顯著的影響。
　　觀察TMT對(duì)海馬神經(jīng)元的損傷及分子生物學(xué)機(jī)制研究，采用尼氏染色觀察神經(jīng)元損傷;流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定大鼠海馬神經(jīng)元凋亡率;免疫組織化學(xué)法檢測(cè)泛素水平變化;Western blot檢測(cè)NF-κB、MAPKs等信號(hào)通路蛋白變化。在整體動(dòng)物模型中,TMT可導(dǎo)致神經(jīng)元尼氏體丟失,神