Importin8對NF-κB信號通路調(diào)控作用的研究.pdf

1、中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)碩士學(xué)位論文Importin8對NF-κB信號通路調(diào)控作用的研究姓名：張海燕申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：細(xì)胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：張必良20090501A b s t r a c tA B S T R A C TN u c l e a r f a c t o r - 1 《：B ( N F - K B ) i sau b i q u i t o u st r a n s c r i p t i o nf a c t o rw h

2、i c hr e g u l a t e sg e n ee x p r e s s i o na n d p l a y sa ni m p o r t a n t r o l e i ni m m u n ea n d i n f l a m m a t o r yr e s p o n s e sa n d t h e r e g u l a t i o no f c e l la p o p t o s i s ．I n u n

3、 s t i m u l a t e d c e l l s ，N F - 1 出e x i s t si nt h e c y t o s o l、Ⅳi t h a n i n h i b i t o rp r o t e i nt e r m e d I r d 3 ．V a i l O U S s t i m u l a t i o nl c a d t o t h e p r o t e o l y t i cd e g r a

4、 d a t i o no fI r d 3a n dt h e n N F ．1 ①i Sr e l e a s e d ．T h ef r e eN F - r J 3i S t r a n s p o r t e di n t on u c l e u s a n dr e g u l a t e s i t s d o w n s t r e a m g e n e e x p r e s s i o n ．T h e r e

5、f o r e ，t h e n u c l e a rt r a n s l o c a t i o n o f N F - r d 3 p l a y s a l l i m p o r t a n t r o l e i n m a i n t a i n i n g c e l l n o r m a lp h y s i o l o g i c a lf u n c t i o n ．T h em e c h a n i s

6、m f o r a c t i v a t i o n o f N F —r , B s i g n a l i n gp a t h w a y h a sn O Wb e e ni l l u s t r a t e dc l e a r l y ．H o w e v e r , t h e m o l e c u l a r m e c h a n i s m o f N F ．r , B n u c l e a r t r a

7、n s l o c a t i o nr e m a i n s i n c o m p l e t e l y u n d e r s t o o d ．M a n y s t u d i e s h a v e d e m o n s t r a t e d t h a t N F —r d 3c o n t a i n s c l a s s i c a l n u c l e a rl o c a t i o n s i g n

8、 a l ( c N L S ) a n dC a nb e t r a n s p o r t e d i n t o t h en u c l e u sv i ai m p o r t i n 吖p 1 p a t h w a y ．M e m b e r so fi m p o r t i n a f a m i l y t h a tr e c o g n i z ec N L So fN F —r , Bh a v e b

9、e e n v a l i d a t e d ，b u to n l yo n em e m b e ro fi m p o r t i n l 3f a m i l y( i m p r o r t i np 1 ) w a s r e p o r t e d f o rN F - k B t r a n s l o c a t i o n ．S ow e w o n d e r w h e t h e r t h e r ea r

10、 eo t h e r i m p o r t i n p si n v o l v e d i n N F - r , Bt r a n s l o c a t i o n ．I m p o r t i n 7a n di m p o r t i n8a r et w om e m b e r so fi m p o r t i n Bf a m i l y , i m p o r t i n7s h a r e so v e r6

11、0 ％i d e n t i t yi n a m i n oa c i ds e q u e n c ew i t hi m p o r t i n8 ．I no u rs t u d y , W ed e p l e t e d i m p o r t i n7 a n d i m p o r t i n8 b yR N A i n t e r f e r e n c ea n d e v a l u a t e dt h ef u

12、 n c t i o n a lc o n s e q u e n c e s o nN F ·r J 3 s i g n a lp a t h w a y ．F i r s t l y , w ed e s i g n e d s i R N A t a r g e t i n g f o ri m p o r t i n7o ri m p o r t i n 8r e s p e c t i v e l y ．T h es

13、 i l e n te f f e c to f t h e s es i R N AW a st e s t e db yR T - P C Ra n dW e s t e r nB l o t t i n ga n a l y s i s ．A f t e rs e l e c t i v e d e p l e t i o no fe x p r e s s i o n o fi m p o r t i n7 o ri m p o

14、 r t i n 8 ，t h ea c t i v i t yo f N F ·r , B ·d e p e n d e n tr e p o r t e rg e n e w a sd e t e c t e du s i n g l u c i f e r a s er e p o r t e r a s s a y ．T h e nw eo b s e r v e d s u b c e l l u l a

15、r l o c a t i o no fN F ．K Bs u b u n i t p 6 5 w i t h I m m u n o f l u o r e s c e n c e ．F i n a l l y ，w e e x t r a c t e d t h e f r a c t i o n s o fc y t o p l a s m i ca n dn u c l e a ra n dt h e nt h e s ep r

16、 o t e i n s w e r e s e p a r a t e do nS D S ．P A G E t od e t e c tp 6 5e x p r e s s i o n ．O u rr e s u l t ss h o w e d t h a t t h ea c t i v i t yo fN F ．1 出w a sr e d u c e ds i g n i f i c a n t l ya n dT N F -

17、 0 【- i n d u c e dp 6 5n u c l e a ra c c u m u l a t i o nw a si n h i b i t e do b v i o u s l yb y s i R N A t a r g e t i n g i m p o r t i n8 ．T h e s es t u d i e s i m p l i e dt h a ti m p o r t i n8 r e g u l a

18、 t e dN F 一心s i g n a lp a t h w a y a tt h e l e v e lo f n u c l e o c y t o p l a s m i c t r a n s p o r t ．A n dt h i sf i n d i n gp r o v i d e df o u n d a t i o n f o rf u r t h e ru n d e r s t a n d i n g t h